[发明专利]一种黄秋葵黄酮的提纯方法

说明书

技术领域：

本发明属于植物化学领域，涉及一种黄秋葵黄酮的提纯方法。

背景技术：

黄秋葵是锦葵科(Malvaceae)秋葵属(Abelmoschu Medic)咖啡黄葵(Abelmoschusesculentus)植物，又名秋葵、补肾草、咖啡葵等。原产于印度，现广泛栽培于热带和亚热带地区。富含黄酮、多糖等成分。北美、日本等发达国家已将新鲜秋葵作为运动员抗疲劳的首选蔬菜及老年人的保健蔬菜，其种子经过加工可作为咖啡替代物，具有较好的提神作用，而且不含咖啡因。李建华等研究表明黄秋葵水提取液可显著延长小鼠游泳时间、耐缺氧时间，提高高温、寒冷条件下小鼠存活率，消除运动后的乳酸堆积，降低血清尿素氮含量，所以黄秋葵水提取液可提高小鼠在应激状态下的生存能力，对疲劳恢复、抗疲劳能力提高具有促进作用。Zn是多种酶的活性中心，通过IL-2系统介导引起淋巴细胞活化，增强儿童免疫功能，以减少呼吸道感染和哮喘发病频率，吕美云等对食用秋葵微量元素进行分析发现食用秋葵富含Zn，因此为其药用价值提供了理论依据。近年来还发现黄秋葵有抗癌等作用，还能缓解淋巴癌的扩散功效。目前国内对黄秋葵的研究主要集中在其外观形态、营养成分含量、终止条件方面，对其利用方面研究甚少。方晴霞等采用UV-2401 PC紫外可见分光光度计在493nm波长处测定黄秋葵中总黄酮含量为2.8％，含量较高，因此，黄秋葵的开发具有很好的前景。建立成本低、工艺简单、可行性强的黄秋葵黄酮的提纯方法对促进黄秋葵资源的开发利用有重要意义。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题是，提供一种黄秋葵黄酮的提纯方法，尤其是一种工艺简单、针对性强、成本低从黄秋葵中提纯黄秋葵黄酮的工艺。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：

一种黄秋葵黄酮的提纯方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)提取步骤：取适量黄秋葵干果，粉碎，用乙醇以冷渗或回流提取法提取，再用丙酮与甲醇的混合液浸提，将所得的两种提取液合并，减压浓缩；

(2)萃取步骤：浓缩物用水饱和的正己烷萃取3次，除去脂溶性成分，保留剩余浸膏，用二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷萃取液，减压蒸馏回收溶剂，得到二氯甲烷萃取物；

(3)分离纯化步骤：将二氯甲烷萃取物用柱层析分离，用水、乙醇、甲醇、丙酮、乙腈或它们的混合溶液洗脱，收集含黄酮的洗脱液，浓缩并用有机溶剂结晶即可获得黄秋葵黄酮。

步骤(1)所述乙醇体积百分比浓度为50-85％，用量为4-12倍质量比；丙酮和甲醇的混合溶液中丙酮的含量占40-80％。

步骤(3)所述柱层析填料为大孔树脂，可选AB-8、HPD100、DM103、LD605、D140、D145、X-5，洗脱剂为乙醇、甲醇、丙酮或乙腈的水溶液或它们的混合溶液，其中水的比例为0-60％，进行梯度洗脱或等梯度洗脱。

步骤(3)所述结晶有机溶剂是丙酮、甲醇或它们的混合溶剂。

本发明的黄秋葵黄酮的提纯方法，采用水、醇、丙酮等无毒或低毒可回收溶剂提取，有机溶剂萃取以及柱层析分离纯化，所用试剂均易回收利用，工艺简单，降低了提取成本，适合工业化生产，为进一步研究黄秋葵黄酮的药理作用提供了依据。

具体实施方式：

下面的实施案例是对本发明的进一步详细描述，但不意味着对本发明的任何限制。

实施例1：

称取1kg黄秋葵干果，粉碎，用4倍80％乙醇冷渗提取提取2次，控制流速5ml/min，再用丙酮-甲醇(1∶1)混合溶液提取，合并两种提取液，减压浓缩，浓缩物用水饱和的正己烷萃取3次，保留剩余浸膏，用二氯甲烷搅拌萃取3次，合并萃取液并减压蒸馏回收二氯甲烷，得二氯甲烷萃取物，将所得萃取物以500g X-5大孔树脂吸附，乙腈水梯度洗脱，其中水占混合溶液的比例由60％，间隔10％，梯度递减至0％，用薄层层析跟踪监测流出液，收集含黄酮的流出液，减压浓缩得黄秋葵黄酮浓缩物，再经丙酮结晶，得16.8g纯度87％的黄秋葵黄酮。

实施例2：