[发明专利]一种吸水链霉菌抗真菌活性物质的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种吸水链霉菌抗真菌活性物质的提取方法。属于生物制药技术领域。

背景技术

本发明的目的在于提取吸水链霉菌BS-112发酵产生的抗真菌活性物质用于防治粮食及饲料中的黄曲霉、赭曲霉、黑曲霉等主要霉变真菌。

霉菌毒素是真菌所产生的次级有毒代谢物，它们存在于丝状真菌的菌丝体和孢子内，广泛污染粮食、食品及饲料等。据联合国粮农组织估算，目前世界上至少有25％的谷物被霉菌毒素污染，每年所造成的经济损失高达数千亿美元。我国是霉菌毒素的重灾区，一些地区尤其是南方地区饲料霉变问题相当严重。由于霉菌的生长消耗了饲料中的营养物质，饲料受霉菌污染后，营养价值严重降低。动物采食了霉菌毒素污染的饲料后，可引起霉菌毒素中毒，生长受到抑制，饲料利用率降低，产仔数降低，禽类的产蛋率和孵化率下降等。而且摄入动物体内的霉菌毒素能够破坏畜禽的代谢解毒器官，降低其免疫力和对疾病的抵抗力。更为严重的是，霉菌毒素可沉积在动物的肝、肾、肌肉、乳汁及禽蛋等动物产品中，通过食物链对人类健康产生极大的潜在危害。因此如何预防和控制饲料中的霉菌毒素，降低其危害，已成为国内外研究的热点。

目前人们主要通过控制水分和低温等技术处理粮食及其制品来防止霉菌生长，并通过物理、化学的方法消减霉菌毒素含量。但是这些方法具有破坏营养、去毒不彻底和成本高等缺陷，从而造成实际防控、脱毒效果不理想。利用生物技术防控、消减霉菌毒素不仅不破坏食物的营养成分，而且无残留毒性、不污染环境和对人畜安全。目前相关的研究主要集中在筛选、利用拮抗微生物及植物产生的抗菌物质来防控粮食及其制品的霉变，如变色栓菌(Trametes versicolor)产生一类抑制寄生曲霉产毒的物质可有效地防治玉米、小麦的霉变；Ono等从链霉菌中提取了一种能抑制黄曲霉毒素产生的物质，该物质与杀稻瘟素结构类似。吸水链霉菌Streptomyces hygroscopicus BS-112由本实验室从泰山林地土壤中分离获得，该菌株对黄曲霉、赭曲霉、黑曲霉等粮食和饲料中常见的霉菌具有较强拮抗作用，发酵性状优异，产生的抗真菌活性物质性质稳定，具有作为饲料和粮食防腐剂的潜力。另外，该菌株产生的抗真菌活性物质还对白僵菌、绿僵菌、黄曲霉等家蚕病原真菌及立枯丝核菌等植物病原真菌也具有较好的抑制作用。

发明内容

本发明提供了一种吸水链霉菌抗真菌活性物质的提取方法。

本发明采用如下技术方案实现：一种吸水链霉菌，该菌株表述为吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)BS-112。已于2009年12月13日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称为CGMCC，地址：北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所。邮编：100101)，保藏号为CGMCC No.3504。

本发明的BS-112菌株是从泰山林地土壤中筛选得到的，该菌株对粮食及饲料中常见霉变真菌(黄曲霉、赭曲霉、黑曲霉、烟曲霉、米曲霉)、家蚕病原真菌(白僵菌、绿僵菌、黄曲霉)及植物病真菌(番茄灰霉病菌、烟草炭疽病菌、立枯丝核菌、苹果轮纹病菌、杨树腐烂病菌)等均有较好的抑制效果，且该菌株具有良好的传代抑菌稳定性。BS-112菌株具有以下特征：①高氏一号培养基上气生菌丝白色，日久成灰色，并有明显的吸水斑，基内菌丝淡黄色，可溶性色素黑色；②孢子丝呈紧密螺旋形，孢子为卵圆形，孢子表面有疣。③生理生化特征为：能使牛奶凝固，淀粉水解，产生硫化氢；可以在15～40℃环境下生长，最适生长温度为28℃，存活pH值为4～10，耐盐性较好；可以利用葡萄糖、麦芽糖、甘油、木糖、果糖、蔗糖、肌醇、甘露醇、醋酸钠和棉子糖；④16S rDNA序列分析结果在GenBank数据库中进行序列最大同源性比对，发现BS-112菌株与链霉菌属的遗传距离最近，与已知菌株链霉菌32(2)(EF063464)的16S rDNA序列同源性达到99.87％。

通过对BS-112菌株的形态特征、培养特征、生理生化特征、细胞壁组分及16S rDNA序列分析，确定其为吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)。

本发明的目的是给出吸水链霉菌BS-112抗真菌活性物质的提取方法，本发明利用大孔吸附树脂法提取BS-112菌株产生的抗真菌活性物质，具有设备简单、操作方便、生产周期短、成本低等优点，利于工业化生产。该抗真菌活性物质对粮食及饲料中的主要霉变真菌具有高效广谱抗性，具有作为食品和饲料防腐剂的潜力。此外，该抗真菌活性物质还对多种家蚕及农作物的病原真菌具有较好的抑制作用，在养蚕业及农业上也具有潜在应用价值。