[发明专利]表达鸡α-干扰素的大肠杆菌及其应用

权利要求书

1.表达鸡α-干扰素的重组菌，是稳定表达序列表中序列1第94-582位所示的DNA分子编码的蛋白的重组大肠杆菌。

2.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于：所述大肠杆菌为大肠杆菌菌株M15[pREP4]。

3.生产鸡α-干扰素蛋白的方法，包括如下步骤：

将表达鸡α-干扰素的重组菌进行培养，诱导表达鸡α-干扰素，收集菌体，破碎菌体，离心收集包涵体，洗涤包涵体，离心收集包涵体；

用含有5-8mol/L盐酸胍的缓冲溶液溶解包涵体，离心收集上清；

采用His-蛋白质镍亲和层析树脂纯化上清，收集目的蛋白峰；

测定收集的蛋白浓度，在冰水浴或者2℃-8℃的条件下，将收集的蛋白加入到复性液中使蛋白质浓度在100-200μg/mL，14℃-16℃静置复性20-24小时。所述复性液中盐酸胍0.3-1.0mol/L、尿素0.5-2.0mol/L、精氨酸0.1-1.0mol/L、还原型半胱氨酸1.0-7.0mmol/L、氧化型胱氨酸0.1-2.0mmol/L、Tris-HCl 10-20mmol/L(pH8-11)、EDTA 1.0-5.0mmol/L(pH8.0)；

采用离子柱对上述复性后的溶液进行纯化、透析，获得鸡α-干扰素蛋白；

所述表达鸡α-干扰素的重组菌是稳定表达序列表中序列1第94-582位所示的DNA分子编码的蛋白的重组大肠杆菌。

4.根据权利要求3所述的生产鸡α-干扰素蛋白的方法，其特征在于：所述大肠杆菌为大肠杆菌菌株M15[pREP4]。

5.鸡α-干扰素蛋白注射液，其活性成分为权利要求3所述生产鸡α-干扰素蛋白的方法制备的鸡α-干扰素蛋白。

6.根据权利要求5所述的鸡α-干扰素蛋白注射液，其特征在于：含有佐剂和/或稳定剂。