[发明专利]一种熊果酸衍生物3-O-酮-12-烯-28-熊果酸的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然药物领域，具体涉及天然化合物熊果酸的化学修饰方法，更具体地，涉及熊果酸衍生物3-O-酮-12-烯-28-熊果酸的合成、分离方法，即利用合成、分离手段制备出3-O-酮-12-烯-28-熊果酸的方法。

背景技术

熊果酸(ursolic acid，UA)又名乌苏酸，属五环三萜类化合物。熊果酸在药用植物中分布广泛，具有镇静、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗溃疡、降低血糖等多种生物活性。现代药理学研究发现，熊果酸具有明显的抗肿瘤作用，包括抑制肿瘤细胞生长、诱导肿瘤细胞分化、抗肿瘤组织血管形成及诱导肿瘤细胞凋亡等。这些结果表明，熊果酸是一种很有前途并有待广泛开发利用的抗肿瘤药物。随着熊果酸抗肿瘤作用机制研究工作的深入进行，熊果酸很有希望成为新的抗肿瘤药物用于临床。然而，熊果酸是一种脂溶性化合物，其在动物体内的生物利用度较低。因此，需通过化学修饰的方法将熊果酸的化学结构进行修饰，以进一步提高熊果酸的抗肿瘤活性和生物利用度。

文献报道对熊果酸的3-位羟基进行氧代，制得3-O-酮-12-烯-28-熊果酸，结构式如下：

3-O-酮-12-烯-28-熊果酸

其抗肿瘤活性明显优于母体熊果酸。然而，在3-O-酮-12-烯-28-熊果酸的制备过程中，需要采用氯铬酸鎓盐(PCC)做为氧化剂，氯铬酸鎓盐反应后形成粘状物，使产品与催化剂分离非常困难，导致收率较低，总收率只有80％左右[Gnoatto，S.C.B.，Klimpt，A.D.，Nascimento，S.D.，Galera，P.，Boumediene，K.，Gosmann，G.，Sonnet，P.，Moslemi，S.European Journal of Medicinal Chemistry，2008，43：1865-1877.]。

发明内容

本发明对熊果酸3-位羟基氧代的制备方法进行改进，提供一种分离方法简单、容易操作、高纯度、高收率的3-O-酮-12-烯-28-熊果酸制备方法。

发明人研究了反应温度、反应时间等对熊果酸3-位羟基氧代制备3-O-酮-12-烯-28-熊果酸的影响，重点对反应完后产物和催化剂的分离方法进行了较大改进。在文献报道的分离方法中，用PCC做氧化剂，反应完后直接进行过滤，我们发现由于在反应过程中氧化剂PCC生成了粘状物，故非常难过滤，操作困难，而且PCC在二氯甲烷中溶解性较好，很难除去。本发明采用反应完后直接浓缩干，再选用适当的有机溶剂进行提取的方法，使产物与催化剂PCC分离方法更简单，操作更容易。得到的粗品再过硅胶柱，优选300-400目硅胶进行柱色谱分离。更优选采用干法过快速柱，操作方法更简单、快速。

试验发现，用不同的有机溶剂对浓缩后的反应液进行提取，产品收率也是不同的。见表1。

表1采用不同溶剂提取的收率

由表1可见，采用四氢呋喃、乙醇、丙醇、异丙醇的提取效果则相对较差，而采用乙醚和丁醇的提取效果较好，产品收率高，因此，本发明优选用乙醚或丁醇提取反应液的浓度物。有机相减压浓缩的温度优选为30-55℃。

本发明将提取液浓缩后得到的粗品采用干法上样过快速硅胶柱处理，才洗脱过程中，试验发现，不同的洗脱剂对产品的收率影响不同，较好的是乙酸乙酯和石油醚的混合溶剂作为洗脱剂。而乙酸乙酯和石油醚之间不同的比例也会直接影响产品收率，见表2。

表2洗脱剂的不同比例对产物的收率影响

从表中数据可以看出，当采用乙醚做提取溶剂的时候，过快速柱的时候用乙酸乙酯∶石油醚为3∶1做洗脱剂效果最好，可以获得最高收率。

本发明制备3-O-酮-12-烯-28-熊果酸的方法操作简单、分离快速，收率大于90％，最高可达95％以上。产品纯度高，含量大于99％。适合大量生产，具有较大的应用研究前景。

具体实施方式

实施例1

①将1.11g熊果酸用10ml干燥的二氯甲烷溶解，冰浴冷却，然后加入0.6g氯铬酸吡啶鎓盐，搅拌反应4小时，去掉冰浴，再在室温条件下反应8小时。

②将上述反应完的反应液减压浓缩干，然后用丁醇提取产物3次，每次10ml，过滤，合并有机相，30℃减压浓缩，得3-O-酮-12-烯-28-熊果酸粗品1.12g。