[发明专利]一种复方扶芳藤制剂的指纹图谱检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药复方扶芳藤制剂的指纹图谱检测方法，属于复方中药制剂的分析检测领域。

背景技术

复方扶芳藤制剂是由扶芳藤、黄芪、红参(或人参)三味中药经适宜的加工、提取而制成的复方制剂，具益气补血、健脾养心的功效，具有补血、抗疲劳、提高机体免疫等作用，特别适用于气血亏虚，精力不足，失眠多梦，神经衰弱等患者。目前采用的质量控制方法是按照《中国药典》2005年版一部收载的复方扶芳藤合剂的质量标准进行。现行质量标准中除有TLC鉴别外，只有一个薄层色谱扫描的含量测定项目，用于测定制剂中黄芪甲苷的含量；显然现有的质量控制方法未能达到全面控制产品质量的目的。在我们的前期研究工作中，曾采用标准加入法测定了复方扶芳藤合剂中的人参皂苷Rg1和Rb1的含量；应用RP-HPLC-UV方法建立了复方扶芳藤合剂的HPLC-UV指纹图谱分析方法及HPLC-UV指纹图谱共有模式；并有用HPLC-ELSD法测定复方扶芳藤合剂中黄芪甲苷含量的报道。从目前已经建立的复方扶芳藤制剂的质量控制方法来看，这些方法主要是采用高效液相色谱一紫外吸收检测(HPLC-UV)的方法进行，而制剂中主要药效成分为皂苷类及糖醇类成分，这些成分在紫外区并无明显的吸收，因而影响了分析方法的专属性和灵敏度。高效液相色谱一蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)技术是上世纪90年代发展起来一种分析检测技术，该技术在分离测定无明显紫外吸收的成分方面具有独特的优势。复方扶芳藤制剂具有补益气血、健脾养心的功效，此功效与该制剂组方中黄芪、红参(或人参)中的皂苷类成分密切相关。现代药理学研究表明，黄芪皂苷可减轻实验性缺氧复氧对培养的心肌细胞的损伤、保护心肌细胞膜、减少心肌酶的漏出、减轻脂质过氧化和清除氧自由基的作用，在中等剂量和大剂量时可使衰竭心脏的心功能各项指标明显改善，具有抗心力衰竭作用。据文献报道，人参及其皂苷Rg₁、Rb₁等具有抗心律失常、抗心肌肥大、改善心肌缺血及抗衰老、抗脂质过氧化，促进蛋白质合成、选择性增强大鼠的免疫功能，加强机体对有害因素的抵抗力等作用。虽然目前已有一些复方扶芳藤制剂中黄芪甲苷的HPLC-ELSD含量测定方法的报道，但这些方法仅能测定少量个别成分，无法全面控制复方扶芳藤制剂的质量。

近年来，指纹图谱已成为国际公认的控制中药或天然药物质量的最有效的手段，在一定程度上可较全面地控制药品的质量。建立中药指纹图谱质量标准，是将现代分析科学的优秀成果与中医药整体综合观的有机融合，可以更有效地运用全面质量管理的理念，是一种充分利用现代科学技术手段所能达到的最好表现中药复杂体系特性的方法。虽然曾有应用高效液相色谱一紫外吸收检测(HPLC-UV)指纹图谱用于复方扶芳藤合剂质量控制的研究报道，但由于紫外吸收检测器对皂苷类成分吸收很差，所以该法测得的指纹图谱中如黄芪甲苷、人参皂苷Rb₁等主要皂苷类成分的特征峰均未能在图谱中显示出来，因而仍无法达到较全面控制产品质量的目的。

发明内容

本发明的解决方案是提供一种对皂苷类成分有更好检测效果的复方扶芳藤制剂中主要皂苷成分的HPLC-ELSD指纹图谱检查方法，该法既具有定性的作用(通过指纹峰位)，又有一定的定量作用(通过相关峰面积)，并可克服HPLC-UV对皂苷类成分检测灵敏度不高的缺点，按此方法测定的指纹图谱重复性高，既可作为复方扶芳藤制剂中主要皂苷成分的检查和鉴定方法，也可用于制剂中黄芪甲苷、人参皂苷Rb1的含量测定。可更全面地控制复方扶芳藤制剂的质量。

本发明复方扶芳藤制剂HPLC-ELSD指纹图谱的测定包括以下步骤：

1.对照品溶液的制备：取人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1和黄芪甲苷对照品适量，精密称定，置容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成一定浓度的混合对照品溶液，即得。

2.供试品溶液的制备：

①复方扶芳藤合剂(口服液)供试品溶液的制备：精密吸取一定量合剂(口服液)样品，用水饱和的正丁醇分别振摇萃取数次，合并正丁醇液，再用氨试液洗涤，减压回收正丁醇，残渣用甲醇溶解并定容，用孔径为0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

②复方扶芳藤胶囊(或片剂)供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的胶囊内容物(或片剂)研细，取一定量细粉，置具塞锥形瓶中，精密加入水饱和正丁醇，密塞，超声提取，放冷，滤过，残渣用水饱和正丁醇少量多次洗涤，收集滤液和洗涤液，置分液漏斗中，用氨试液洗涤多次，取正丁醇层水浴蒸干，残留物加甲醇溶解并定容，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。