[发明专利]人体唾液保存固定液及其制备与应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及到一种人体唾液保存固定液的配方、制备及应用。

背景技术

在分子生物学科研中，血样中的DNA提取在基因工程和分子生物学研究中占有重要地位。通常用于PCR反应和其他分子测试的DNA主要从抗凝血中提取，但保存时间较长的血样，即使添加枸橼酸钠或EDTA抗凝剂，也会形成血块，给提取带来不便。同时，由于采集血液对人体能造成一定的创伤而且需要一定的专业技能才能完成，限制了血液作为DNA来源的广泛应用。

人体唾液中含有口腔黏膜脱落细胞，收集唾液作为DNA样本来源有以下优点：①无穿刺、无伤害取样，避免了采血的痛苦和取尿的尴尬；②一些人群并不适合采血，如小孩、老人。另一些人群则抗拒取血，如某些精神疾病患者，患者的亲属；③简便易行，唾液收集只需离心管：④廉价、高效，不需要配备注射器、消毒用具，也不用培训专业的抽血人员.节省了大量人力物力；即使经过2周的室温存放，依然能提取出完整的基因组DNA。当大范围收集样本时，唾液样本适合在各地区的实验室和收集点之间传递。

人体的唾液中99％是水，有机物主要是唾液淀粉酶、粘多糖、粘蛋白及溶菌酶等，无机物有钠、钾、钙、氯等离子，同时还含有多种细菌、口腔脱落细胞等。因此，如何避免唾液腐败、保持脱落细胞内基因组DNA完整，对唾液作为基因组DNA来源的应用至关重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种人体唾液保存固定液及其制备及应用。

本发明的人体唾液保存固定液包括如下组分：蔗糖、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、MgCl2、异硫氰酸胍及水。

以质量体积浓度计，蔗糖为0.05mol/L～0.5mol/L，MgCl₂为0.5mmol/L～20mmol/L，pH为7～10的Tris-HCl为1mmol/L～30mmol/L，异硫氰酸胍为0.5mol/L～10mol/L。

较佳的，以质量体积浓度计，蔗糖为0.1mol/L～0.4mol/L，MgCl₂为2m mol/L～15mmol/L，pH为7～10的Tris-HCl为3m mol/L～20m mol/L，异硫氰酸胍为1mol/L～6mol/L。

优选的，以质量体积浓度计，蔗糖为0.2mol/L～0.4mol/L，MgCl₂为2m mol/L～10mmol/L，pH为7～9的Tris-HCl为5m mol/L～15m mol/L，异硫氰酸胍为2mol/L～5mol/L。

最佳的，蔗糖为0.25mol/L～0.35mol/L，MgCl₂为3m mol/L～8m mol/L，pH为7～8.5的Tris-HCl为8m mol/L～12m mol/L，异硫氰酸胍为2.5mol/L～3.5mol/L。

本发明人体唾液保存固定液的配制方法包括下列步骤：

(1)分别配制Tris-HCl缓冲液、蔗糖、MgCl₂及异硫氰酸胍的水溶液并灭菌；

(2)无菌条件下，将经步骤1获得溶液与无菌水一起按比例混合配制获得人体唾液保存固定液。

本发明的人体唾液保存固定液可用于保存人体唾液。该固定液能够杀灭唾液中含有的细菌、抑制核酶的活性，保存基因组DNA的完整性。

保存及基因组DNA抽提实验结果表明，本发明的唾液固定液具有很好的保存作用，其保存效果明显优于使用单一组分保存唾液，且成本较低，配制方便，有望成为唾液作为基因组DNA来源的广泛应用所必需的较佳固定液。

附图说明

图1实施例1抽提的唾液基因组DNA电泳图

1为基因组DNA

图2实施例2固定液固定后放置于不同温度、不同时间的唾液样本基因组DNA抽提琼脂糖凝胶电泳图

1为4℃放置2周

2为25℃放置2周

3为37℃放置2周

4为37℃放置1个月

图3实施例3固定液处理后提取的唾液基因组DNA经PCR扩增后的琼脂糖凝胶电泳图条带为扩增片段DNA

图4实施例4不同成分的固定液固定后的唾液样本基因组DNA抽提琼脂糖凝胶电泳图固定液1无异硫氰酸胍；固定液2中无Mgcl2；固定液3中无Tris；固定液4中无蔗糖

图5实施例5不同成分对提取唾液基因组DNA的因素效应图

图6实施例5固定液处理后提取的唾液基因组DNA琼脂糖凝胶电泳图