[发明专利]一种卵黄稀释液的配制新方法

权利要求书

1.一种卵黄稀释液的配制新方法，其特征在于：它包括下述步骤：

1)卵黄的制备：选取新鲜鸡蛋，将蛋壳用75％的酒精消毒，在无菌条件下去蛋壳、蛋清；用已灭菌滤纸将卵黄膜表面的蛋清吸干，用无菌注射器抽取卵黄；

2)4.6倍Tris-A及6倍Tris-B母液的配制：

100ml 4.6×Tris-A    母液配方

药品名称             重量(g)

Tris base            16.25

柠檬酸               7.92

D-Fructose           5.82

100ml 6×Tris-B      母液配方

药品名称             重量(g)

Tris base            21.45

柠檬酸               11.99

D-Fructose           8.83

按照上述配方用双蒸水配制4.6倍Tris-A母液，6倍Tris-B母液，分别调PH值为6.80±0.02，用0.22μm无菌滤器过滤；

3)0.5倍Tris-A溶液和0.5倍Tris-B溶液的配制：用无菌水将4.6倍Tris-A母液与6倍Tris-B母液分别稀释为0.5倍Tris-A溶液和0.5倍Tris-B溶液，配制好的溶液在4℃环境下保存，备用；

4)Tris-A、Tris-B稀释液的配制

①Tris-A稀释液的配制

将0.5倍Tris-A溶液和卵黄按7∶2的体积比加到一无菌容器中，于4℃环境下用磁力搅拌器以400-500转/分钟搅拌2小时，再静置20h，然后将上清液4℃、3850g离心60min，取上清液，并按1∶9.4的体积比加入4.6倍Tris-A母液，摇匀，加入抗生素：庆大霉素终浓度500μg/ml；林可霉素终浓度300μg/ml；奇霉素终浓度600μg/ml；泰乐菌素终浓度100μg/ml，调PH值为6.80±0.02，于4℃冰箱中保存备用；

②Tris-B稀释液的配制

将0.5倍Tris-B溶液和卵黄按7∶2.3的体积比加到一无菌容器中，于4℃环境下用磁力搅拌器以400-500转/分钟搅拌2小时，再静置20h，然后将上清液4℃、3850g离心60min，取上清液，并按7∶93的体积比加入6倍Tris-B母液，再加入无菌甘油，甘油最终比例为12％(v/v)，摇匀，加入抗生素：庆大霉素终浓度26.6μg/ml；林可霉素终浓度15.9μg/ml；奇霉素终浓度31.9μg/ml；泰乐菌素终浓度5.3μg/ml，调PH值为6.80±0.02，于4℃冰箱中保存备用。