[发明专利]一种病原菌液基薄层涂片检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种病原菌液基薄层涂片检测试剂盒，其特征在于检测试剂盒是由下列组成：

(1)预处理液，是由密度为0.88g/ml的5-50ml氨水，1-10g氯化钠及余量为水配制成的100ml混合液；

(2)液化剂，是蛋白酶或巯基还原剂；

(3)稀释液，为0.5-5重量％的氯化钠溶液；

(4)鉴别染色液，是化学染色液或免疫染色液；

(5)耗材，包括(a)离心沉淀制片组合，(b)磁力搅拌子。

2.如权利要求1所述检测试剂盒，其特征在于所述的液化剂蛋白酶是0.5-5重量％糜蛋白酶或0.5-5重量％胃蛋白酶。

3.如权利要求1所述检测试剂盒，其特征在于所述的液化剂巯基还原剂是浓度为3.0-30.0mg/ml巯基乙醇、浓度为4.0-40.0mg/mlβ-巯基乙醇、浓度为3.5-35.0mg/ml 1，4-二巯基丁二醇、浓度为4.5-45.0mg/ml二硫赤藓糖醇或浓度为5.0-50.0mg/ml二硫苏糖醇。

4.如权利要求1所述检测试剂盒，其特征在于所述的鉴别染色液为化学染色液时，是革兰染色液，包括结晶紫，碘液，脱色剂和复染剂四种试剂。

5.如权利要求1所述检测试剂盒，其特征在于所述的鉴别染色液为化学染色液时，是抗酸染色液，包括石炭酸复红液，5％盐酸酒精液和亚甲基蓝液三种试剂。

6.如权利要求1所述检测试剂盒，其特征在于所述的鉴别染色液为免疫染色液，它包含辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗体溶液和相对于HRP的显色剂。

7.如权利要求1或6所述检测试剂盒，其特征在于所述的鉴别染色液为免疫染色液，它包含的HRP标记抗体溶液是内含HRP标记的针对病原菌抗原特异的单抗或多抗溶液，或是能和病原菌特殊蛋白结合的内含HRP标记的IgG抗体溶液。

8.如权利要求1或6所述检测试剂盒，其特征在于所述的鉴别染色液为免疫染色液，它包含的相对于HRP的显色剂包括三种液体：(a)浓度为0.10-0.80mg/mlDAB(3，3’-二氨基联苯胺)底物液，(b)浓度为0.33-1重量‰双氧水和(c)浓度为2.00-15.00mg/ml氯化钴溶液或浓度为5.00-20.00mg/ml硫酸镍氨溶液。

9.权利要求1所述病原菌液基薄层涂片检测试剂盒的检测方法，其特征在于包含下列步骤：

(1)取样取含病原菌的样品；

(2)样品的均相化处理在样品中以样品和预处理液1∶3-20的体积比加入预处理液，以样品和液化剂1∶0-5的体积比加入液化剂，和磁力搅拌子一起加热45-65℃搅拌5-30分钟，转速为1,000-2,000转/分；

(3)液基离心沉淀薄层制片取上述已均相化的样品和稀释液按1∶0-6体积比混合，放入吊篮式离心机的吊蓝中，以1,000-3,000转/分转速离心5-15分钟，进行液基离心沉淀制片，得到液基离心沉淀薄层涂片；

(4)鉴别染色在含同一样品的一张以上的载玻片上进行鉴别染色，采用常规的化学染色法或免疫染色法；

(5)观察与计算结果在完成染色后，按常规通过显微成像系统进行观察，并通过系统软件连接计算机进行结果计算。

10.如权利要求9所述检测试剂盒的检测方法，其特征在于所述第(1)步中的样品是痰液、支气管灌洗物、胸腹水、脓液和创伤感染组织、脑脊液、关节液、尿液或粪便。

11.如权利要求9所述检测试剂盒的检测方法，其特征在于所述第(1)步中样品含有的病原菌为二类：(a)细菌是大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、结核杆菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、军团菌、B型流感嗜血杆菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、肠原杆菌或硝酸盐阴性杆菌；(b)真菌是白色念珠菌、曲霉菌或放线菌。

12.如权利要求9所述检测试剂盒的检测方法，其特征在于所述第(2)步中的预处理液是取之于由密度为0.88g/ml的5-50ml氨水、1-10g氯化钠及余量为水配制的100ml混合液。

13.如权利要求9所述检测试剂盒的检测方法，其特征在于所述第(2)步中的液化剂是蛋白酶或巯基还原剂。