[发明专利]欧前胡素在制备抗肿瘤多药耐药性药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属制药技术领域，涉及欧前胡素的新用途，即欧前胡素在制备抗肿瘤多药耐药性药物中的应用。

背景技术

肿瘤化疗是治疗肿瘤的一种基本手段，但肿瘤化疗的效果会因为肿瘤细胞获得抗药性而失败，多药耐药(multiple drug resistance MDR)指肿瘤细胞对不同结构和作用机理的多种药物产生交叉耐药性，是化疗失败的主要原因。MDR的产生机制复杂，其中一个原因与MDR1基因编码产物--ATP能量依赖性药物外排泵P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)过度表达有关，致使药物外排增加，细胞内药物浓度减少；此外，也与细胞凋亡过程有关，缺失凋亡蛋白Bax或过表达抗凋亡蛋白Bcl-2均会导致某些肿瘤细胞产生多药耐药性。

目前临床上使用的抗癌药物，阿霉素，表阿霉素，丝裂霉素，柔红霉素，紫杉醇，长春新碱，顺铂等，均为P-糖蛋白的底物，为耐药肿瘤细胞所抗，因此，当肿瘤细胞内P-gp高表达后，肿瘤细胞获得的抗药性，并不针对一种抗癌药，而是对多种抗癌药，即多药耐药。

欧前胡素(imperatorin)属于呋喃香豆素的一种。来源非常广泛，并且具有多种生物活性，例如：抗诱变、镇痛、镇静、抗癫痫、抗肝炎、抗骨质疏松等，近期还发现其具有抗癌作用，但是欧前胡素对多药耐药性肿瘤细胞的抑制增殖作用未见有报道。

发明内容

本发明的目的是提供欧前胡素在制备抗肿瘤多药耐药性药物中的应用，该欧前胡素是从中药白芷中提取，所述药物由欧前胡素与制剂允许的药物赋形剂或载体组成。所述欧前胡素具有如下结构：

本发明提供的药物，其制剂形式主要包括液体制剂、颗粒剂、片剂、冲剂、软胶丸、软胶囊、滴丸剂或注射剂。

本发明提供的药物，制剂的给药形式主要包括口服给药或注射给药。

本发明提供的欧前胡素对多药耐药肿瘤细胞的杀伤作用明显优于紫杉醇，阿霉素，顺铂等临床常用药，欧前胡素杀死高表达P-糖蛋白肿瘤细胞的机理是不受高表达P-糖蛋白影响，诱导耐药肿瘤细胞凋亡，与其亲本药敏细胞一致，目前临床上缺乏能逆转肿瘤多药耐药性的药物，因此欧前胡素具有很好的制备抗肿瘤多药耐药性药物的应用前景。

附图说明

图1是从中药白芷中提取欧前胡素的液相色谱分析图。

图2是耐药肿瘤细胞(R-HepG2)及亲本药敏细胞(HepG2)的P-糖蛋白表达量比较。

图3是不同浓度欧前胡素对肝癌及多药耐药肝癌R-HepG2体外增殖抑制图。

图4是欧前胡素诱导耐药肝癌R-HepG2细胞产生凋亡的DNA梯状条带凝胶电泳图。

图5是欧前胡素诱导耐药肝癌R-HepG2细胞产生凋亡的AnnexinV-PI双染流式细胞分析图。

图6是欧前胡素影响耐药肝癌R-HepG2细胞线粒体膜电位变化的JC-1染色流式细胞分析图。

图7是欧前胡素诱导耐药肝癌R-HepG2细胞线粒体释放细胞色素c的免疫印迹图。

图8是Caspase-9抑制剂逆转欧前胡素诱导的耐药肝癌R-HepG2凋亡流式细胞分析图。

图9是欧前胡素对人多药耐药性肝癌R-HepG2裸小鼠移植瘤体内生长抑制效果图。

具体实施方式

本发明结合附图和实施例作进一步的说明。这些实例仅用于说明目的，而不用于限制本发明范围。

实施例一：从中药白芷中分离纯化欧前胡素及其结构鉴定

实验方法

1.分离和纯化：将白芷的干燥根在研磨机中研磨成粉，称量，得到干燥的白芷粉末3kg。将粉末在石油醚、乙酸乙酯溶剂中浸泡48h，其中石油醚与乙酸乙酯的体积比为2∶1。然后将其倒入圆底烧瓶中，在套式恒温器里100℃左右加热回流2h左右，圆底烧瓶上口接上冷凝管并持续通水以达到冷凝回流的目的。冷却后倒出液体并过滤，滤渣留在圆底烧瓶内，并向其中再加入适量的石油醚、乙酸乙酯溶剂，继续以同样的方法加热回流白芷粉末，共回流三次，以达到充分提取的目的。将过滤后的滤液合并，然后将滤液置于旋转蒸发仪中减压蒸馏、浓缩，持续数小时，直到不再有溶剂蒸出为止。旋转蒸发仪的水浴温度为40-50℃，循环、制冷，回收溶剂。最后将最终所得浓缩物转移到小圆底烧瓶内，称重、记录，共得到120.8g浓缩物。