[发明专利]一种综合利用猪血的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从猪血中同时提取凝血酶和猪血水解蛋白的方法，属生物活性物质的分离提取技术领域。

背景技术

猪血是一种优质蛋白质，营养学家称其为液体肉。猪血中含有人体所需要的几乎全部的营养成分：蛋白质、氨基酸、维生素、糖和钠、钾、铁、钙等人体不可缺少的微量元素。其中蛋白质18.9％、非蛋白有机体1.2％、矿物质0.9％、水分79％，另外，其氨基酸组成平衡，含人体所需的8种必需氨基酸的总量高于人乳和全蛋，特别是赖氨酸的含量高达9％，符合联合国粮农组织、世界卫生组织(FAO/WHO)专家组推荐模式。

我国是猪血资源大国，但在猪血资源开发利用上却落后于不少发达国家，由于经简单加工的猪血蛋白不易被消化吸收且颜色较深、血腥味较重适口性差，所以很久以来，许多猪血作为废弃物倒进地沟，既造成巨大浪费，又污染环境。

国外对动物血的开发始于上世纪初，初期主要用于饲料工业。随着高新技术的发展，国内外许多研究部门尤其注重用生化技术加工猪血用于食品、制药等方面的研究。目前血液产品在保健品行业已经形成了一定的规模，产业化前景良好。近年来，我国猪血深度开发也取得了重要进展，猪血作为一个营养宝库，已经得到极其广泛的研究，所提出的加工生产工艺流程不下几十种。从直接食用猪血豆腐，到酶解猪血粉，复合氨基酸粉的生产，已经取得了长足的进展，但是仍然不能满足人类的需要。存在的问题是大多数工艺还不完善，如有的工艺能耗大耗时长、有的工艺只能生产单一产品、有的工艺得率低、有的工艺使用大量有机溶剂，存在环保缺陷等。而本发明方法克服了上述缺点，发明了零排放的利用猪血同时生产凝血酶和猪血水解蛋白的绿色方法。

发明内容

本发明属生物活性物质的分离提取技术领域。具体涉及将新鲜猪血经抗凝处理后以血浆和血球为出发底物分别制备凝血酶和猪血水解蛋白的方法。血浆经低温冷冻、沉淀收集凝血酶原、离子激活、酶液纯化等步骤制得高活性的凝血酶；血球经破壁、溶血、复合酶分段酶解、过滤除菌等步骤制得高活性的猪血水解蛋白。该方法制得的猪血水解蛋白中氨基酸含量占蛋白质的80％以上，易于吸收利用。本发明方法充分利用了原料，一次投料可以生产两种高附加值产品。整个生产过程避免使用毒性大的有机溶剂，克服了产品单一、溶剂残留等缺陷，降低了生产成本。用本发明方法，1L猪血可制得凝血酶精品6000U以上、高活性的猪血水解蛋白粉150g以上。

具体来说，本发明的步骤由以下几步构成：

1、抗凝猪血的制备：取检疫合格的新鲜猪血放入容器1中，该容器中已事先加入了0.5％-5％(w/v)溶于少量去离子水中的抗凝剂柠檬酸三钠，充分搅拌均匀，低温静置备用。

2、血浆、血球分离：低温静置后，抗凝猪血上层为无色透明液体为血浆，下层深红色粘稠液体为血球。用虹吸法将上层血浆吸到容器2中；余下的血球经转速为3000-3500r/min离心后，将上层血浆合并到容器2中低温冷冻备用，血球则冷冻贮藏至容器3中过夜待用。

3、血浆沉淀收集凝血酶原：容器2中的血浆解冻后，滤除上层漂浮的白色絮状物后，用2-8倍生理盐水稀释后再用2mol/L醋酸调pH至5.1-5.2，低温静置过夜，收集沉淀即得凝血酶原。

4、凝血粗酶液制备：将收集的凝血酶原沉淀溶解于生理盐水中，加热保温至37℃，用1.0％CaCl₂溶液，低速搅拌(500-800r/min)20-30分钟，激活凝血酶原，过滤收集滤液即得凝血酶粗酶液。

5、凝血酶精品制备：向凝血酶粗酶液中加入8-10倍冷生理盐水，用截留相对分子量(Mr)为60000的超滤膜处理，浓缩至原体积的1/20-1/25后收集截留液。该液体即为精制凝血酶液，也可将截留液冷冻干燥，即得粉状凝血酶精品。

6、血球破壁、溶血：向容器3中加入血球体积的适量生理盐水(使液体中蛋白质含量为8％-10％)，升温至10℃左右，高速搅拌(1000r/min以上)20-30分钟。

7、血球蛋白分段酶解：用4.0mol/L NaOH调节pH至7.5，将温度升至37-40℃，加入适量复合蛋白酶I，保温2小时后，再升温至55-60℃，保温3小时；调节pH至9.0，加入适量复合蛋白酶II，保温4小时使血球蛋白充分水解；

8、猪血水解蛋白制备：酶解结束后，冷却至常温，用0.22um的滤膜过滤除菌即可制成液体猪血水解蛋白，也可将该液体喷雾干燥后制成猪血水解蛋白粉。

具体实施方式

下面的实例将具体说明本发明的操作方法，但不能作为对本发明的限定。

实例1