[发明专利]RANKL-HBsAg表达构建物、酵母、制法及应用

权利要求书

1.一种用于表达RANKL-HBsAg重组蛋白的构建物，所述构建物含有1个表达盒或2-15个串联排列的表达盒，每个所述表达盒包含以下元件：

(a)起始信号元件AOX；

(b)RANKL-HBsAg重组蛋白编码序列，所述RANKL-HBsAg重组蛋白编码序列由以下部分组成：

(i)RANKL蛋白编码序列，

(ii)HBsAg编码序列，和

(iiii)任选的位于RANKL和HBsAg编码序列之间的连接肽编码序列；

(c)终止信号元件AOX(TT)。

2.如权利要求1所述的构建物，其特征在于，所述RANKL-HBsAg重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示。

3.一种表达RANKL-HBsAg重组蛋白的酵母细胞，其特征在于，所述酵母细胞的染色体中整合有表达RANKL-HBsAg重组蛋白的构建物，所述构建物含有1个表达盒或2-15个串联排列的表达盒，每个所述表达盒包含以下元件：

(a)起始信号元件AOX；

(b)RANKL-HBsAg重组蛋白编码序列，所述RANKL-HBsAg重组蛋白编码序列由以下部分组成：

(i)RANKL蛋白编码序列，

(ii)HBsAg编码序列，和

(iiii)任选的位于RANKL和HBsAg编码序列之间的连接肽编码序列；

(c)终止信号元件AOX(TT)；

其中，所述酵母细胞在诱导下表达RANKL-HBsAg重组蛋白，并且所述的重组蛋白在所述酵母中自行装配成病毒样颗粒。

4.如权利要求3所述的酵母细胞，其特征在于，所述酵母细胞选自：毕赤酵母、酿酒酵母或汉逊酵母。

5.如权利要求3所述的酵母细胞，其特征在于，所述病毒样颗粒将RANKL展示于表面，且能刺激哺乳动物免疫系统产生抗RANKL抗体。

6.一种包含RANKL-HBsAg重组蛋白病毒样颗粒，其特征在于，所述病毒样颗粒是由权利要求3所述的酵母细胞产生的。

7.一种制备RANKL-HBsAg重组蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：

(i)在适合表达的条件下，培养权利要求3所述的酵母细胞，从而使其表达RANKL-HBsAg重组蛋白；和

(ii)从所述酵母细胞中分离纯化RANKL-HBsAg重组蛋白。

8.一种RANKL-HBsAg重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白是由权利要求1中所述的构建物表达产生的、由权利要求3中所述的酵母细胞产生的，或是通过权利要求7所述的方法制备的。

9.权利要求3所述的酵母细胞、权利要求6所述的病毒样颗粒或权利要求8所述的RANKL-HBsAg重组蛋白的用途，其特征在于，其用于制备预防或治疗RANK/RANKL/OPG系统相关疾病或症状的疫苗。

10.如权利要求9所述的用途，其特征在于，所述RANK/RANKL/OPG系统相关疾病或症状选自：骨质疏松症、类风湿关节炎、骨肿瘤、乳腺癌、前列腺癌、血管钙化或血管钙化引起的疾病和症状。

11.一种疫苗组合物，其包含：

(a)权利要求8所述的RANKL-HBsAg重组蛋白；以及

(b)免疫学上可接受的载体和/或佐剂。