[发明专利]一种决明子的化学成分提取分离方法

说明书

技术领域：

本发明是涉及一种决明子的化学成分提取分离方法，该方法使用逆流色谱作为分离手段，采用循环洗脱的分离模式，对中药决明子中的化学成分进行了提取分离。

背景技术：

决明子是我国常用的中药材之一，其主要有效成分为蒽醌类化合物。经研究发现，决明子中的蒽醌类化合物具有降血脂，抗衰老，抗微生物，抗癌等活性。决明子的提取物也作为降血脂，减肥的保健品在市场上销售。

系统分离法是从传统中药中分析并获得生物活性物质的重要手段。由于中药中化学成分的复杂性，生产者需要从中药中分离出尽可能多的化学成分，分别测定其活性，或者在活性指导下对有活性的化学成分进行分离。无论采取哪种策略，多步骤的分离过程都是无法避免的。在传统的分离方法中，多步骤的分离往往会带来微量成分的不可逆吸附，从而可能损失有活性的化学成分。

发明内容：

本发明就是针对上述问题，提供了一种决明子的化学成分提取分离方法。该方法使用高速逆流色谱作为分离手段，采用循环洗脱的分离模式，对中药决明子中的的化学成分进行了分析。

为实现本发明的上述目的，本发明采用如下的实验方案。

分离过程包括如下三个步骤：

1.样品的粗分

根据在实验前进行的分配系数的测定结果发现，样品所含的化合物覆盖了很大的极性范围，所以在粗分中采取了梯度洗脱的方法。首先，将正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水(1∶1∶∶1∶1，v/v)体系的上相打入TBE-300A中，然后将机器转速调到850转/分钟，同时，以2-4ml/min的速度打入正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水(1∶1∶1∶1，v/v)体系的下相。当两厢在柱子中平衡以后，将含有400mg样品的20ml下相打入柱子中，以正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水(1∶1∶1∶1，v/v)体系的下相进行洗脱。在第300分钟时，将流动相切换成正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水(4∶3∶4∶3，v/v)体系的下相。洗脱液每10ml接收为一个馏分，进行HPLC分析，根据分析结果进行合并。

2.从合并的馏分中分离得到化合物

馏分A，B和C是由步骤一得到的三个馏分，在步骤二中将在TBE-300A上进行进一步分离。步骤二的初始阶段与步骤一类似，先将溶剂体系的上相打入柱子中，以2ml/min的速度打入下相平衡。然后将馏分A溶解于下相中，进样。从柱子末端流出的液体被再次打入柱子中，进行循环洗脱，直到获得满意的分离度。馏分B和C的分离过程与A类似。

3.获得的馏分的HPLC分析

粗提物、逆流色谱获得的馏分和化合物由配有二极管阵列检测器的HPLC仪进行分析。HPLC条件如下：柱子：Xterra C₁₈柱(150mm×4.6mm I.D.，3.5μm，Waters)；流动相组成：乙腈-水(50∶50)；流速：1ml/min。检测波长280nm；柱温：30℃

具体实施方式：

本发明提供了一种决明子的化学成分提取分离方法，该方法使用高速逆流色谱作为分离手段，采用循环洗脱的分离模式，对中药决明子中的的化学成分进行了提取分离。

分离过程包括三个步骤：样品的粗分；从合并的馏分中分离得到化合物；获得的馏分的HPLC分析；

本发明从决明子中分离得到5个蒽醌类化合物，化合物的纯度经HPLC检测分别为97.2％，98.7％，97.7％，98.1％和99.4％，结构通过ESI及核磁共振光谱进行了确定。