[发明专利]一种检测蚊传病原体的多重PCR试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种检测蚊传病原体的多重PCR试剂盒，其特征在于含有如下引物：

1)检测黄病毒属病毒第一轮PCR的引物

上游引物的序列如SEQ ID NO：1所示，

下游引物的序列如SEQ ID NO：2所示；

2)检测黄病毒属病毒第二轮PCR的引物

上游引物的序列如SEQ ID NO：3所示，

下游引物的序列如SEQ ID NO：4所示；

3)检测疟原虫第一轮PCR的引物

上游引物的序列如SEQ ID NO：5所示，

下游引物的序列如SEQ ID NO：6所示；

4)检测疟原虫第二轮PCR的引物

上游引物的序列如SEQ ID NO：7所示或如SEQ ID NO：8所示，

下游引物的序列如SEQ ID NO：9所示；

5)检测马来丝虫第一轮PCR的引物

上游引物的序列如SEQ ID NO：10所示，

下游引物的序列如SEQ ID NO：11所示；

6)检测马来丝虫第二轮PCR的引物

上游引物的序列如SEQ ID NO：12所示，

下游引物的序列如SEQ ID NO：13所示。

2.如权利要求1所述的一种检测蚊传病原体的多重PCR试剂盒，其特征在于：所述的黄病毒属病毒包括乙型脑炎病毒、或者登革热病毒1型、或者登革热病毒2型、或者登革热病毒3型、或者登革热病毒4型、西尼罗病毒和黄热病毒。

3.如权利要求1所述的一种检测蚊传病原体的多重PCR试剂盒，其特征在于：所述的疟原虫属包括恶性疟原虫、或者间日疟原虫、或者诺氏疟原虫、或者卵形疟原虫、或者三日疟原虫。

4.如权利要求1所述的一种检测蚊传病原体的多重PCR试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒中还含有聚合酶链式反应试剂。

5.如权利要求1所述的一种检测蚊传病原体的多重PCR试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒中还含有阴性质控标准品。

6.如权利要求1所述的一种检测蚊传病原体的多重PCR试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒中还含有阳性标准品。

7.如权利要求5所述的一种检测蚊传病原体的多重PCR试剂盒，其特征在于：所述的阴性质控标准品为灭菌ddH₂O。

8.如权利要求6所述的一种检测蚊传病原体的多重PCR试剂盒，其特征在于：所述的阳性标准品为乙型脑炎cDNA、或者登革热病毒cDNA、间日疟原虫DNA、恶性疟原虫DNA。

9.如权利要求4所述的一种检测蚊传病原体的多重PCR试剂盒，其特征在于所述的聚合酶链式反应试剂中各组份为：

1)10倍聚合酶链式反应缓沖液；

2)四种脱氧核糖核苷酸，四种脱氧核糖核苷酸的浓度均为2.5mM；

3)小牛血清蛋白BSA，小牛血清蛋白BSA的浓度为5mg/ml；

4)EXTaq酶，EXTaq酶的浓度为5U/μL；

5)灭菌双蒸水。

10.如权利要求9所述的一种检测蚊传病原体的多重PCR试剂盒，其特征在于所述的10倍聚合酶链式反应缓沖液的成份如下：

Tris-HCl      100mM

KCl           500mM

MgCl₂         15mM。

11.如权利要求1所述的一种检测蚊传病原体的多重PCR试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒中的所有的引物的浓度均为10μM。

12.一种检测蚊传病原体的方法，其特征在于：包括一个提取蚊虫核酸的步骤，还包括一个将提取的核酸在PCR扩增仪上进行扩增的步骤，还包括一个将扩增的产物进行电泳检测的步骤，还包括确定蚊传病原体具体种类的测序步骤。