[发明专利]猪链球菌2型hp0245基因编码蛋白作为保护性抗原的应用

说明书

技术领域

本发明属于兽医微生物学和动物传染病技术领域。具体涉及一个猪链球菌2型的保护性抗原基因分离、克隆以及它编码的蛋白在疫苗和ELISA诊断试剂盒中的应用。

背景技术

猪链球菌(Streptococcus suis)是引起猪链球菌病的病原菌，能够导致猪脑膜炎、败血症、肺炎、心内膜炎、关节炎，甚至死亡，给世界养猪业造成了巨大的经济损失。在已知的33个血清型(1-31，33，1/2)中，猪链球菌2型是流行范围最广，致病性最强的血清型，并且可以导致特定人群的感染。至1968年丹麦学者首次报道人感染猪链球菌2型以来，全世界已有550多份人感染猪链球菌2型的病例。其中，1998、2005年在我国江苏省和四川省爆发了较大规模的人感染猪链球菌2型的疫情，分别导致14和38人死亡。流行病学调查结果显示，猪链球菌2型是造成我国2003-2007年猪链球菌病的优势血清型，分离率达到了43.2％。该血清型菌株造成宿主系统性感染，导致多器官病变坏死，并且猪链球菌2型常与猪繁殖与呼吸综合症病毒、猪圆环病毒一起引起混合感染(Wei Z，Li R，Zhang A，He H，Hua Y，Xia J，Cai X，Chen H and Jin M.Characterization of Streptococcus suis isolates from the diseased pigs in China between 2003 and 2007.VetMicrobiol，2009，137：196-201)。鉴于猪链球菌2型的流行范围之广、危害性之强，因此，我们亟需有效的预防和治疗手段来控制猪链球菌病的发生和流行。

目前，国际上报道的关于猪链球菌的疫苗种类有：灭活苗、弱毒苗、基因缺失疫苗以及亚单位疫苗。然而，由于灭活疫苗、弱毒苗和基因缺失疫苗存在毒力返强的生物安全隐患，基于保守蛋白质所设计的亚单位疫苗被认为是猪链球菌疫苗研究领域的一个热点。猪链球菌是细胞外病原菌，其细胞表面结构蛋白和分泌蛋白在刺激机体产生免疫反应过程中发挥了重要作用，因此，这类蛋白成为了猪链球菌亚单位疫苗研究的候选蛋白。以猪链球菌毒力因子MRP，EF以及溶血素为目标的亚单位疫苗由于一些菌株不含这些毒力因子而逐渐被淘汰应用(Jacobs A A，Loeffen P L，van den Berg A J and Storm P K.Identification，purification，and characterization of a thiol-activated hemolysin(suilysin)of Streptococcus suis.Infect Immun，1996，62：1742-1748；Wisselink H J，Vecht U，Stockhofe-Zurwieden N and Smith H E.Protection of pigs against challengewith virulent Streptococcus suis serotype 2 strains by a muramidase-released protein and extracellular factorvaccine.Vet Rec，2001，148：473-477)。随后，一些具有较好免疫保护力的猪链球菌细胞表面蛋白被先后报道出来，包括：38KDa蛋白(Okwumabua O and Chinnapapakkagari S.Identification of the gene encoding a38-kilodalton immunogenic and protective antigen of Streptococcus suis.Clin Diagn Lab Immunol，2005，12：484-490)，Sao(Li Y，Gottschalk M，Esgleas M，Lacouture S，Dubreuil J D，Wilson P and Harel J.Immunizationwith recombinant Sao protein confers protection against Streptococcus suis infection.Clin Vaccine Immunol，2007，14：937-943)，SsuiDRAFT 0103(Aranda J，Garrido M E，Cortes P，Llagostera M and Barbe J.Analysis ofthe protective capacity of three Streptococcus suis proteins induced under divalent-cation-limited conditions.Infect Immun，2008，76：1590-1598)以及6PGD(Tan C，Liu M，Liu J，Yuan F，Fu S，Liu Y，Jin M，Bei W andChen H.Vaccination with Streptococcus suis serotype 2 recombinant 6PGD protein provides protection against S.suis infection in swine.FEMS Microbiol Lett，2009，296：78-83)。其中，Sao蛋白还具有较好的猪链球菌病诊断应用前景。近年来，随着基因组测序以及蛋白质组学技术在猪链球菌研究中的运用，越来越多的保护性抗原被鉴定出来。张安定等发现了3个细菌细胞表面蛋白免疫小鼠或猪后能够使其对抗猪链球菌2型强毒的感染，这3个蛋白分别是Enolase(Zhang A，Chen B，Mu X，Li R，Zheng P，Zhao Y，Chen H and Jin M.Identification and characterization of a novel protective antigen，Enolase of Streptococcus suis serotype 2.Vaccine，2009，27：1348-1353)，HP0197(Zhang A，Chen B，Li R，Mu X，Han L，Zhou H，Chen H and Jin M.Identifi cation ofa surface protective antigen，HP0197 of Streptococcus suis serotype 2.Vaccine，2009，27：5209-5213)和HP0272(Chen B，Zhang A，Li R，Mu X，He H，Chen H and Jin M.Evaluation of the protective efficacy of a newlyidentified immunogenic protein，HP0272，of Streptococcus suis.FEMS Microbiol Lett，2010，307：12-18)。