[发明专利]一种分离植物或微生物总RNA的试剂组合物及其制备方法

权利要求书

1.一种分离柑橘类植物、烟叶或梨腐烂病菌丝体总RNA纯化试剂组合物，其特征在于，包括以下组分：

1)溶液A：

a.按重量/体积计异硫氰酸胍50％；

b.醋酸钠0.1mol/L；

c.氯化钠0.25mol/L；

d.氯化镁10mmol/L；

e.按重量/体积计十二烷基肌氨酸钠0.7％；

f.糖原60μg/ml；

g.按体积/体积计β-巯基乙醇0.5％

2)溶液B：pH4.0-5.0的水饱和酚；

3)裂解液：

a.按体积/体积计，溶液A 50％-55％；

b.按体积/体积计，溶液B 50％-45％；

c.按重量/体积比甲基红0.2‰；

将溶液A和溶液B按体积比1∶1混合后，加入甲基红使溶液呈玫瑰红色，即为所述的裂解液。

2.一种分离柑橘类植物、烟叶或梨腐烂病菌丝体总RNA的方法，其特征在于包含以下步骤：

(1)、制备RNA纯化试剂组合物：

1)溶液A：

a.按重量/体积计异硫氰酸胍50％；

b.醋酸钠0.1mol/L；

c.氯化钠0.25mol/L；

d.氯化镁10mmol/L；

e.按重量/体积计十二烷基肌氨酸钠0.7％；

f.糖原60μg/ml

g.按体积/体积计β-巯基乙醇0.5％

2)溶液B：pH4.0-5.0的水饱和酚；

3)裂解液：

a.按体积/体积计，溶液A 50％-55％；

b.按体积/体积计，溶液B 50％-45％；

c.按重量/体积比甲基红0.2‰；

将溶液A和溶液B按体积比1∶1混合后，加入甲基红使溶液呈玫瑰红色，即为所述的裂解液；

(2)样品裂解

根据样品称重，按照每0.1g样品添加1ml裂解液的比例吸取裂解液于离心管中，将样品液氮研磨后迅速添加至含裂解液的离心管中剧烈震荡，样品匀浆后在室温下放置5min，然后置于冰上直至所有样品匀浆完成，不立即进行RNA提取的样品可将匀浆置于-20℃保存；

(3)抽提

按每1ml裂解液添加200μl氯仿的比例向匀浆中加入氯仿，剧烈震荡使溶液呈乳浊状，冰上静置5min后于4℃下离心，离心后吸取上层水相于新离心管中并加入等体积氯仿再次抽提，离心，除去水相中残余的酚；

(4)沉降RNA

吸取上层水相于新离心管中，加入等体积异丙醇，冰上至室温25℃放置10min后，离心回收RNA；

(5)洗涤溶解RNA

在室温条件下，用浓度为75％的乙醇使RNA沉淀悬浮，洗涤1-2次后，将其沉淀晾干，溶于焦碳酸二乙酯处理的去离子水中。