[发明专利]检测食品中转基因成分的方法

说明书

技术领域

本申请涉及生物技术领域。具体地说，本申请涉及检测食品中转基因成分的方法和试剂盒。

背景技术

随着转基因技术的发展，通过导入外源基因可以实现对植物和动物原有基因的改造，从而得到营养成分改善、抗逆性能提高、性状优良的植物和动物。目前，越来越多的转基因植物和动物被批准进入商品化生产。与此同时，这类通过转基因技术得到的动植物及其加工产品(如食品)的使用安全性问题也日益引起了人们的关注。因此，转基因食品成分的检测成为转基因食品安全评估的基础。

目前国际上对食品中转基因成分的检测主要采用PCR法，以及在此基础上发展出的实时定量PCR法及多重PCR法。所检测的靶基因大多是已知商品化的转基因食品成分中的几种，主要是抗虫、抗除草剂成份。但是，对于正在研发阶段的抗逆、品质改良、生长发育等转基因植物成分的检测则基本未涉及。

发明内容

本发明建立了高效、快速、灵敏、特异的多重PCR(Multiplex PCR)-LDR(连接酶检测反应)-UA(通用芯片)检测方法，将有助于转基因食品成分的检测，有利于在此基础上进一步评估新型转基因食品成分的安全性。本发明可被食品安全检测机构应用于食品中转基因成分的检测。

本发明第一方面提供了一种用于检测食品中是否存在转基因成分以及存在何种转基因成分的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含两组引物组，其中第一引物组包含特异性扩增CaMV 35S启动子、nos终止子和FMV 35S启动子的引物对；第二引物组包含特异性Bar基因、Bt基因、Cpt1基因、Rch10基因、Xa21基因、lrp基因和osvte基因的引物对。

本发明另一方面提供了一种检测食品中是否存在转基因成分以及存在何种转基因成分的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

a)提取所述食品的DNA；

b)用第一引物组对所述提取的DNA进行PCR扩增，所述第一引物组包含特异性扩增CaMV 35S启动子、nos终止子和FMV 35S启动子的引物对；用第二引物组对提取的DNA进行PCR扩增，所述第二引物组包含特异性Bar基因、Bt基因、Cpt1基因、Rch10基因、Xa21基因、lrp基因和osvte基因的引物对；

c)检测所述PCR扩增产物，从而确定所述食品中是否存在转基因成分以及存在何种转基因成分。

本发明还有一个方面提供了一种用于检测核酸混合物中是否存在转基因成分以及存在何种转基因成分的试剂盒，所述试剂盒包含以下两组探针：

1)鉴别探针，所述鉴别探针包含与目标基因的第一片段互补的第一探针序列以及与固定在基因芯片上的Zip探针序列互补的序列；和

2)通用探针，所述通用探针包含与目标基因的第二片段互补的第二探针序列，所述第一片段和所述第二片段毗邻，且所述通用探针携带可检测标记。

本发明还有一个方面提供了一种检测核酸混合物中是否存在转基因成分以及存在何种转基因成分的方法，该方法包括以下步骤：

a)提供核酸混合物；

b)在核酸混合物中加入通用探针和鉴别探针，用耐高温DNA连接酶进行连接酶反应；其中，所述鉴别探针包含与目标基因的第一片段互补的第一探针序列以及与Zip探针序列互补的序列；所述通用探针包含与目标基因的第二片段互补的第二探针序列，所述第一片段和所述第二片段毗邻，且所述通用探针携带可检测标记；

c)使步骤b)所得反应物在固定有Zip探针的芯片上进行杂交反应，检测杂交结果，从而确定核酸混合物中是否存在转基因成分以及存在何种转基因成分。

本发明以转基因水稻为例，提供了一种检测食品中是否存在转基因成分以及存在何种转基因成分的方法，该检测方法具有高效、快速、灵敏、特异的优点。本发明的方法有助于检测市场上是否有未经批准的转基因水稻流入，以满足消费者对于转基因产品的知情权和选择权，同时为进一步评估新型转基因食品成分的安全性奠定了基础。

本发明的其它方面、优点或益处可通过下文详细描述结合附图得知。

附图说明

图1显示了用PCR检测Bt/CpT1双价抗虫转基因水稻及其亲本(未转基因水稻)中的启动子和终止子的结果，其中1：空白对照；2：未转基因水稻，3：Bt/CpT1转基因水稻。

图2显示了转AGLU/RCH10基因水稻及其亲本中肌动蛋白、18s rRNA和nos终止子的PCR扩增结果，其中1：未转基因水稻；2-7：转AGLU/RCH10基因水稻的几个株系。