[发明专利]一种快速分析浓香型白酒窖池微生物群落结构的方法

权利要求书

1.一种快速分析浓香型白酒窖池微生物群落结构的方法，其特征包括以下步骤：

1)称(量)取适量窖池样品，经前处理后加入9ml柠檬酸缓冲液、10ml甲醇、10ml氯仿，提取样品中的脂质；

2)将步骤1)中获得的有机相经硅胶层析小柱分离，分别用10ml氯仿、10ml丙酮和10ml甲醇，收集含有极性脂的甲醇相；

3)将步骤2)得到的含有极性脂的有机相加入1ml甲苯∶甲醇((1∶1)v/v)，1ml 0.2mol/l氢氧化钾-甲醇，37℃水浴15min，进行碱性条件下温和甲酯化；

4)将步骤3)得到的脂肪酸甲酯通过2ml氯仿萃取；

5)向步骤4)得到的脂肪酸甲酯中加入正十九酸甲酯(19∶0)定量标准品，进行GC-MS分析；

6)将步骤5)得到的样品磷脂脂肪酸分布数据，基于主成分分析法进行窖池微生物群落结构的分析。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤1)中的实验材料可以为不同窖龄浓香型白酒窖池中不同类型的样品；该方法尤其适合于对窖泥、糟醅和黄水的分析。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤1)中前处理方法为：

(窖泥和糟醅)加入30ml柠檬酸缓冲液(pH 4.0)，提取30min，4层纱布过滤，滤液2500r/min，离心15min，取上清液，10000r/min离心10min，倾去上清液，30ml柠檬酸缓冲液溶解，重复洗涤3次，收集菌团；

(黄水)10000r/min离心10min，倾去上清液，10ml柠檬酸缓冲液溶解，重复洗涤3次，收集菌团。

4.根据权利要求1所述的方法，其中步骤5)中气相色谱-质谱仪采用的是Thermo Trace GCUltra DSQ II气质联用仪，检测中使用的升温程序如下：进样口温度：250℃；进样量：0.5μl；分流比：10∶1；载气(He)流速：1ml/min；起始柱温：50℃，保持2min；以5℃/min升至220℃，保持15min。质谱条件：电子强度：70eV；离子源温度：200℃；扫描范围：35～400amu。