[发明专利]一种检测水稻种子是否带细菌性褐条病菌的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物检测技术，具体的说是涉及一种检测水稻种子是否带细菌性褐条病菌的方法。

背景技术

水稻细菌性褐条病是由燕麦噬酸菌燕麦亚种(Acidovorax avenae subsp.avenae)引起，首先在日本被报道，随后在亚洲，非洲，美洲和欧洲的许多国家相继报道。在中国，该病的致病菌通常被认为是黍假单胞菌(Pseudomonas panici stapp)或丁香假单胞(Pseudomonas syringae pv.panici)，但均未见到由上述两种菌引起的水稻细菌性褐条病病原鉴定报告。A.avenae subsp.avenae还是玉米、燕麦、大麦、高粱、甘蔗、黍、狐尾草等多种禾本科植物的致病菌。

水稻细菌性褐条病是通过种子传播的病害，在中国只有个别文献报道了A.avebae subsp.avebae引起田间发病，所以在田间很难观察到苗期症状。通常情况下，病原菌只能在水稻种子上分离得到，然而在水稻种子上有许多其它的腐生菌和假单胞属的其他菌给分离鉴定带来了很大的困难，Song W，Y等在Detection of Acidovorax avenae ssp.avenae in rice seedsusing BIO-PCR一文中报道研究了一对BIO-PCR引物用于检测A.avebaesubsp.avenae，然而，该检测技术要求专业人员才能完成，需要PCR等贵重仪器设备，且不能区别活细菌与死细菌。

发明内容

本发明提供了一种简单易操作的检测水稻种子是否带细菌性褐条病菌的方法。

一种检测水稻种子是否带细菌性褐条病菌的方法，包括：

将发芽的水稻种子栽培到经灭菌的珍珠岩中，待水稻幼苗生长至3～4叶期，如水稻幼苗出现细菌性褐条病症状，则判断水稻种子带细菌性褐条病菌。

水稻种子一般栽培在稻田土当中，稻田土营养物质丰富，有利于微生物的生长，因此还有许多其它种类的微生物，微生物之间存在竞争抑制作用，水稻不易发病；而珍珠岩中营养物质匮乏，水稻抗病性较弱，而且微生物种类和数量较少，水稻容易发病。

所述的水稻种子栽培条件为白天16h，温度29～31℃，黑夜8h，温度24～26℃。

所述的珍珠岩粒径大小在2～4mm，培养的湿度为80～90％

本发明还提供了一种检测水稻种子细菌性褐条病菌带菌率的方法，包括：

将若干发芽的水稻种子栽培到经灭菌珍珠岩中，待水稻幼苗生长至3～4叶期，对表现出细菌性褐条病症状的水稻幼苗计数，计算得到水稻种子细菌性褐条病菌的带菌率。该方法是一个粗略的方法，但基本能反应实际情况。

本发明方法通过将水稻种子栽培在珍珠岩中，带细菌性条病致病菌的种子长成幼苗后就会表现出相应症状，检测方法简单，易操作。

附图说明

图1是本发明水稻褐条病菌典型菌株R1001的FAME脂肪酸图谱；

图2是本发明水稻细菌性褐条病病原菌16S树状图；

图3是本发明不同培养基质中水稻细菌性褐条病发病情况。

具体实施方式

实施例1水稻幼苗的培养

水稻种子用灭菌蒸馏水浸种，在30℃恒摇床浸种24h，后均匀的摆放在装有滤纸(由杭州沃华滤纸有限公司提供，直径9cm)的培养皿中，加10ml灭菌蒸馏水湿润，30℃催芽12h，后将发芽一致的种子分别播种到装有珍珠岩(粒径2～4mm)和稻田土(珍珠岩和稻田土均在121℃灭菌20min)的纸杯(直径7.5cm)中，每杯3棵，各15个杯子，放在人工气候箱内培养，培养条件设置为：夜间8h，25℃，白天16h，30℃，待水稻幼苗长到3～4叶期，发现水稻品种中浙优1号(浙江勿忘农股份有限责任公司)在珍珠岩培养基质中有大量类似水稻细菌性褐条病症状的水稻幼苗，但在稻田土中的水稻苗没有发现类似的症状，其他品种[中优218(合肥丰乐种业股份有限公司)，丰优58(合肥丰乐种业股份有限公司)，天优998(安徽徽商农家福有限公司)]在这两种培养基质中几乎没有上述症状发生。人工气候箱在培养水稻前已经经过消毒处理，排除了在水稻幼苗培养的过程中受病菌侵染致病的可能性，在珍珠岩培养基质中有大量的水稻细菌性褐条病症状的水稻幼苗，说明中浙优1号水稻种子带有病原菌。

实施例2菌株分离纯化