[发明专利]表皮生长因子受体的外显子缺失变异体

说明书

技术领域

本发明属于生物技术和医学领域，具体地说，本发明涉及新的编码人表皮生长因子受体变异体de4EGFR(Epidermal growth factor receptor with Exon 4deletion，de4EGFR)的多核苷酸，以及此多核苷酸编码的多肽。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的用途和制备。

背景技术

表皮生长因子受体(EGFR)是原癌基因c-erb B的170千道尔顿(Kilodalton)膜糖蛋白产物。EGFR基因是最初在鸟类红细胞增多症病毒中识别的erb B致癌基因的细胞同系物⁽¹⁾。已在各种人类肿瘤中观察到这种致癌基因通过基因放大的活化^(2-8)。

已有文献表明，EGFR在多种类型的人类实体瘤中过表达⁽⁹⁾。这些肿瘤包括肺癌、结肠癌、乳腺癌、胃癌、脑癌、膀胱癌、头颈部肿瘤、卵巢癌、肾癌和前列腺癌⁽⁹⁾。v-erbB致癌基因和正常EGFR基因之间的一个主要区别在于病毒致癌基因是正常受体截断氨基的变型；它们缺少大部分细胞质外结构域，但保留了跨膜和酪氨酸激酶结构域⁽¹⁰⁾。这导致了它不能结合表皮生长因子(EGF)，但仍可以磷酸化其它蛋白质^(11，12)。

各种基因变化都可以发生于病毒性erb B致癌基因中，例如，基因的羧基末端中发生氨基酸的取代和缺失。其中氨基端缺失对于致癌作用尤为关键。氨基端缺失是大多v-erb B致癌基因的一个特征，包括由启动子的插入或逆转录病毒转导引起的那些氨基端缺失。相反，羧基末端缺失似乎只与逆转录病毒转导引起的肿瘤有关，而且似乎决定于宿主范围和肿瘤类型的特异性。以氨基端缺失的鸟类c-erb B基因或人EGF受体的转染实验表明该缺失可以使细胞转化⁽¹³⁾。

EGFR基因的放大发生于40-50％的恶性人类神经胶质瘤中^(14-16)，受体基因的重排在许多具有基因放大的肿瘤中较为明显。重排似乎更多地影响基因的氨基末端^(17-20)。

迄今已发现至少有八种EGFR变体：1)EGFRvI缺少EGFR的大部分细胞外结构域。2)EGFRvII由EGFR的细胞外结构域中的83aa框内缺失组成。3)EGFRvIII由EGFR的细胞外结构域中的267aa框内缺失组成。4)EGFRvIV含有EGFR的细胞质结构域中的缺失。5)EGFRvV含有EGFR的细胞质结构域中的缺失。6)EGFR.TDM/2-7含有EGFR的细胞外结构域中的外显子2-7的重复。7)EGFR.TDM/18-26含有EGFR的细胞外结构域中的外显子18-26的重复。8)另外，存在第二种更为罕见的具有在外显子11和14之间的连接点引入新颖组氨酸残基的缺失的EGFRvIII突变体(EGFRvIII/Δ12-13)⁽²¹⁾(图1)。

EGFRvIII是在人类癌症中表皮生长因子(EGF)受体最常见发生的变体⁽²²⁾。在基因放大的过程中，在胞外区发生267个氨基酸缺失，产生新的连接点(甘氨酸)。已知EGFRvIII未表达于任何正常组织⁽²²⁾。然而，EGFRvIII在许多肿瘤细胞中有表达，例如，78％的乳腺癌组织，50-70％神经胶质瘤，16％非小细胞肺癌以及73％卵巢癌表达EGFRvIII⁽²²⁾；此外，发明者所在实验室在最近也发现了肝癌中有EGFRvIII的存在^(23，24)。

然而，迄今为止，人们对于癌症侵袭和转移的原因和机理的了解还不够深入，因此本领域迫切需要开发与癌症侵袭和转移相关的蛋白。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的、与癌症侵袭和转移密切相关的表皮生长因子受体变异体de4EGFR多肽以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。

本发明的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。

在本发明的第一方面，提供新颖的、分离出的de4EGFR多肽，它包括：具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。

较佳地，该多肽选自下组：

(a)具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽；