[发明专利]一种植物RNA的提取工艺

说明书

技术领域：

本发明属于化工技术领域，更具体地说，是涉及一种植物RNA的提取工艺。

背景技术：

由于植物细胞壁厚实且成分复杂，细胞内富含单宁、萜烯、色素和酚等次生代谢物及蛋白质和多糖等大分子，这些不但影响RNA提取效率，而且干扰其后的逆转录和酶切。另外，RNA极易受到内源或外源RNA酶的影响而降解以及受到蛋白质和DNA等的污染而降低RNA的质量，因此从植物中提取RNA较难。

生长在干旱荒漠区的强旱生植物霸王，其体内次生代谢物含量高，然而，现阶段，还未有厂家从霸王中进行RNA的提取。

发明内容：

本发明就是针对上述问题，提供了一种操作简单、反应条件温和的植物RNA的提取工艺。

为了实现本发明的上述目的，本发明采用如下技术方案，工艺步骤为：

RNA提取缓冲液的成分有：异硫氰酸胍2～4mol/L、柠檬酸钠(pH 7.0)25～35mmol/L、十二烷基肌氨酸钠0.5～1.0％(W/V)、β-巯基乙醇2～4％(V/V)；

取预冷的提取缓冲液加入到离心管中，置于冰上；取霸王叶片、根系在装有过量液氮的研钵中充分研磨，用预冷的药匙将霸王叶片、根系粉末转入离心管中，剧烈震荡10min，冰上静置5min；加入醋酸钠、水饱和酚、体积比为20∶1～24∶1的氯仿和异戊醇混合溶液，摇匀，离心20min；吸取上清液转入另一个离心管中，加入预冷的异丙醇，在-10～-20℃下沉淀1.5h；离心，弃上清液，倒置空干，加入70～80％的乙醇，悬浮沉淀；离心，弃上清液，加入70～80％的乙醇，洗涤RNA沉淀，室温下干燥10min，即得成品。

本发明的有益效果：

1.本发明操作简单、耗时短；

2.本发明提取的RNA受多糖、多酚和蛋白质等污染的程度小，纯度高；

3.本发明提取的RNA完整、纯净，无降解；

4.本发明的产量为257.6μg/g。

具体实施方式：

本发明的工艺步骤为：

RNA提取缓冲液的成分有：异硫氰酸胍2～4mol/L、柠檬酸钠(pH 7.0)25～35mmol/L、十二烷基肌氨酸钠0.5～1.0％(W/V)、β-巯基乙醇2～4％(V/V)；

取预冷的提取缓冲液加入到离心管中，置于冰上；取霸王叶片、根系在装有过量液氮的研钵中充分研磨，用预冷的药匙将霸王叶片、根系粉末转入离心管中，剧烈震荡10min，冰上静置5min；加入醋酸钠、水饱和酚、体积比为20∶1～24∶1的氯仿和异戊醇混合溶液，摇匀，离心20min；吸取上清液转入另一个离心管中，加入预冷的异丙醇，在-10～-20℃下沉淀1.5h；离心，弃上清液，倒置空干，加入70～80％的乙醇，悬浮沉淀；离心，弃上清液，加入70～80％的乙醇，洗涤RNA沉淀，室温下干燥10min，即得成品。

实施例1：

RNA提取缓冲液的成分有：异硫氰酸胍4mol/L、柠檬酸钠(pH 7.0)35mmol/L、十二烷基肌氨酸钠0.5％(W/V)、β-巯基乙醇2％(V/V)；

取预冷的提取缓冲液加入到离心管中，置于冰上；取霸王叶片、根系在装有过量液氮的研钵中充分研磨，用预冷的药匙将霸王叶片、根系粉末转入离心管中，剧烈震荡10min，冰上静置5min；加入醋酸钠、水饱和酚、体积比为20∶1～24∶1的氯仿和异戊醇混合溶液，摇匀，离心20min；吸取上清液转入另一个离心管中，加入预冷的异丙醇，在-10～-20℃下沉淀1.5h；离心，弃上清液，倒置空干，加入70～80％的乙醇，悬浮沉淀；离心，弃上清液，加入70～80％的乙醇，洗涤RNA沉淀，室温下干燥10min，即得成品。

实施例2：

RNA提取缓冲液的成分有：异硫氰酸胍2mol/L、柠檬酸钠(pH 7.0)25mmol/L、十二烷基肌氨酸钠1.0％(W/V)、β-巯基乙醇4％(V/V)；

取预冷的提取缓冲液加入到离心管中，置于冰上；取霸王叶片、根系在装有过量液氮的研钵中充分研磨，用预冷的药匙将霸王叶片、根系粉末转入离心管中，剧烈震荡10min，冰上静置5min；加入醋酸钠、水饱和酚、体积比为20∶1～24∶1的氯仿和异戊醇混合溶液，摇匀，离心20min；吸取上清液转入另一个离心管中，加入预冷的异丙醇，在-10～-20℃下沉淀1.5h；离心，弃上清液，倒置空干，加入70～80％的乙醇，悬浮沉淀；离心，弃上清液，加入70～80％的乙醇，洗涤RNA沉淀，室温下干燥10min，即得成品。