[发明专利]百合无菌苗叶片直接诱导小鳞茎的繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养，具体地说，涉及百合(Liliumlongiflorum)的组织培养和无菌苗叶片器官直接发生的方法。

背景技术

近年来，百合以其花朵大型、色彩丰富、气味芳香而被世界各国人民所喜爱，迅速占据世界切花市场。其中，亚洲百合杂种系、东方百合杂种系、麝香百合杂种系为主要的切花种类。切花生产所用种球依赖进口这是一个不争的事实。并且进口百合鳞茎在第二年往往会退化，所以每年均需要进口。

虽然百合的鳞片扦插和组织快繁的研究有很多报道，但是鳞片扦插容易引起种性退化的问题，而组织快繁再生产中应用较少，因为试管苗移栽时容易大量死亡。由于这些方法还不能够满足百合种球生产需求，因此，需要探索新的百合鳞茎快繁方法，并且形成相关的种球生产技术体系。

发明内容

本发明的目的是提供一种百合无菌苗叶片直接诱导小鳞茎的繁殖方法及其应用。

百合无菌苗叶片直接诱导小鳞茎的繁殖方法，包括将无菌苗的叶盘接种至小鳞茎诱导培养基，再将诱导的小鳞茎接种至小鳞茎膨大培养基，其中所述的小鳞茎诱导培养基为：MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1～0.5mg/L+蔗糖25～35g/L+琼脂6.25g/L，所述的小鳞茎膨大培养基为：MS+活性炭(AC)2.0～2.5g/L+蔗糖90g/L+琼脂6.25g/L。

其中，所述百合叶盘接种后进行暗培养，所述小鳞茎接种至小鳞茎膨大培养基后进行光照培养，所述的光照条件为自然散射光2500～3000Lux加人工辅助光1500～2000Lux，光照时间为12h/d。

本发明提供的百合无菌苗叶片直接诱导小鳞茎的繁殖方法，还包括制备百合无菌苗，具体为：将百合鳞片表面灭菌后接种至丛生芽诱导培养基，诱导产生丛生芽，将诱导的丛生芽的单芽接种至丛生芽增殖培养基，获得大量无菌苗。其中所述的丛生芽诱导培养基为MS+6-BA2.0mg/L+NAA 0.1～0.5mg/L+蔗糖25～35g/L+琼脂6.25g/L，或MS+6-BA2.0mg/L+2，4-D 0.1～0.5mg/L+蔗糖25～35g/L+琼脂6.25g/L，或MS+6-BA2.0mg/L+IAA 0.1mg/L+蔗糖25～35g/L+琼脂6.25g/L，优选为MS+6-BA2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.25g/L，其中所述的丛生芽增殖培养基为：MS+6-BA1.0～2.5mg/L+NAA 0.1～0.5mg/L+蔗糖25～35g/L+琼脂6.25g/L，优选为MS+6-BA2.0mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.25g/L。

本发明提供的百合无菌苗叶片直接诱导小鳞茎的繁殖方法可应用与百合鳞茎的快速繁殖。

与传统的百合鳞茎发生途径相比较，叶片直接诱导产生小鳞茎的方法有以下优点：

(1)在丛生芽诱导的基础上，再次扩大了诱导率，(一个单芽可以产生3～8个叶片，每个叶片又可以产生1～3个小鳞茎，)。因此，比传统的丛生芽诱导小鳞茎诱导率提高了3～24倍。

(2)缩短了鳞茎膨大的培养时间，传统的单芽培养成小鳞茎需要较长的时间，而叶片直接产生的小鳞茎，大小均匀、整齐一致，在膨大培养基上生长一个月后，即产生鳞片叶。

(3)叶片直接产生的小鳞茎带有较长的根，不需要专门的诱导生根阶段。

附图说明

图1是鳞片接种45天后的诱导情况。

图2是鳞片诱导的不定芽继代45天之后的生长情况。

图3是单芽诱导90天之后的生长情况。

图4是叶盘在MS+6-BA2.0mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.25g/L的诱导情况。

图5是诱导出的小鳞茎在MS+AC2.0g/L+蔗糖90g/L+琼脂6.25g/L接种一个月的生长情况。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1

百合鳞片诱导：选取无病虫害的购买自北京绿尔有限公司的‘西伯利亚’百合鳞片，用洗洁精清洗后，在自来水下冲洗30min，用75％酒精浸泡35s，无菌水冲洗两次，再用0.1％升汞灭菌不同时间，即外层鳞片灭菌15min，中层鳞片灭菌12min，内层鳞片灭菌10min，无菌水冲洗4～5次，然后在无菌滤纸的培养皿中切块备用。