[发明专利]PI4KB siRNA及其在制备抑制SARS-CoV感染的药物中的用途

说明书

技术领域

本发明涉及PI4KB siRNA、表达针对PI4KB的siRNA的表达载体、包含该表达载体的宿主细胞、活性成分为所述针对PI4KB的siRNA或所述表达载体的组合物。本发明还涉及一种用于预防和/或治疗SARS-CoV感染的试剂盒，其含有所述针对PI4KB的siRNA或所述表达载体。本发明还涉及所述针对PI4KB的siRNA或所述表达载体在制备预防和/或治疗SARS-CoV感染的药物中的用途以及PI4KB作为SARS-CoV感染的治疗靶点的用途。

背景技术

导致严重急性呼吸综合征(SARS)世界性爆发流行的病原体是一种新型的冠状病毒：SARS冠状病毒(SARS-CoV)[1]。SARS最早在2002-2003冬季爆发于亚洲，迅速蔓延至世界多个国家。截止到2003年7月31日，大规模流行的末期，全世界26个国家诊断为SARS的8096名病例中，有774人死亡[2]，致死率达到近10％。

SARS冠状病毒是一种有包膜的RNA病毒，为单链正义RNA。其基因组全长29kb，包括13到15个开放阅读框(ORF)。编码4个主要结构蛋白，即Spike(S)、Envelope(E)、Membrane(M)、Nucleocapsid(N)蛋白。其中最为重要的是SARS-CoV的刺突蛋白(Spike protein，S蛋白)，它主要介导病毒与宿主细胞受体的结合，并介导病毒与宿主细胞膜的融合[3]。Spike蛋白作为I型病毒膜蛋白，与很多有包膜病毒的跨膜糖蛋白类似。SARS Spike蛋白已经被证实可以诱导VeroE6细胞凋亡。

SARS-CoV受体的发现对于研究该致命性病毒进入宿主细胞具有划时代的意义。2003年，Li[4]进行的S蛋白S1亚基与VeroE6细胞的体外免疫共沉淀实验首次证实了ACE2(血管紧张素转换酶2)是SARS-CoV的功能性受体。而这进一步被SARS-CoV的体外重组S蛋白以及ACE2基因敲除小鼠模型的体内实验所证实[5]。2004年，DC-SIGN以及与其 同源性的分子L-SIGN也被证实是SARS-CoV的受体。不过，与ACE2这个主要受体相比，其介导病毒进入细胞的效率比较低[6，7]。

目前，已有大量研究报道了SARS-CoV进入宿主细胞的方式。首先有学者提出SARS-CoV是通过直接膜融合方式进入细胞[8，9，10]。后来Yang等人[11]报道SARS-CoV进入细胞是pH依赖性，升高胞内酸性小体pH的药物可以阻断SARS-CoV进入细胞。Simmons G等人[12]发现一种pH依赖的蛋白酶内体蛋白酶-组织蛋白酶L(Cathepsin L)的抑制剂能够抑制SARS-CoV的进入。这些都提示SARS-CoV可以通过内吞方式进入宿主细胞。Wang等人[13]进一步发现SARS-CoV可以通过内吞进入宿主细胞，并且病毒侵入宿主细胞VeroE6的过程不依赖于网格蛋白(clathrin)与胞膜窖(caveolea)结构。脂筏，这种细胞表面重要的脂质微区在病毒进入细胞的过程中起重要作用。

基于对SARS-CoV的进入以及进入后在宿主细胞内生活周期的大量研究，目前针对SARS-CoV感染的抑制剂也应运而生。主要分为针对病毒进入的抑制剂和针对细胞内生活周期的抑制剂。

针对SARS-CoV进入的抑制剂主要有：1.以ACE2受体作为靶点：包括可溶性ACE2，ACE2抗体以及针对ACE2催化活性的小分子抑制剂，如NAAE[14，15]。由于ACE2被证实在SARS-CoV感染中可以起到保护肺脏的作用，因此，ACE2受体抑制剂作为抗病毒的策略需要慎重考虑[16，17]。2.针对Spike蛋白的单克隆抗体，如S3.1[18]，CR3022联合CR3014[19，20]。3.针对Spike蛋白S2结构域的膜融合抑制剂，如：七肽重复序列抑制剂[21，22]，环状序列抑制剂[23]。4.小分子抑制剂，如VE607[24]，Cathepsin L(CTSL)抑制剂，如MDL28170。由于Bosch等人[25]发现CTSL可以在位于S1和S2结构域之间的T678处切割SARS-CoV Spike蛋白，由此激活了Spike蛋白的膜融合功能。CTSL可以作为抑制SARS-CoV进入的新靶点。