[发明专利]一种球状节杆菌CNA9及其应用

说明书

技术领域

本发明微生物领域，具体涉及一种球状节杆菌及其应用。 

背景技术

由于传统农业生产中粗放的种植模式下化学农药，杀虫剂，生长调节剂的过量使用，使环境背负了巨大压力，继而引起的水土流失，土壤退化，农产品安全等问题也严重影响到人们的生产和生活。同时随着经济社会的发展，人们对高安全高品质农产品需求的增加，使得在农业生产中高环境亲和力的生物源制剂的需求越趋旺盛，特别是对微生物肥料和微生物源药剂的需求巨大。 

目前，国际上的生物源制剂一般分为：动物，植物，微生物。但是在我国农业实际应用中，可以进行大规模工业化生产的植物源农药、微生物源农药和微生物源肥料。微生物生长调节剂是介于微生物源农药和肥料间的一种，是利用微生物的生理活性物质等来调节植物的生长发育，有益于植物生长和产量。这类微生物通常是附生于根际中的菌，称为植物根际促生菌(plant growth promoting rhizobacteria，PGPR)。 

产IAA菌作为植物根际促生菌(PGPR)中的一种，附着在植物根系或叶表面，利用植物代谢产生分泌物的同时产生IAA和少量GA等植物激素来影响植物的生理过程和形态变化。具体表现为可直接促进根的伸长，从而增大了与土壤中营养物质接触的机会；可提高植物体内内源IAA的含量；诱导植物防卫基因的表达，提高植物体抗病，抗旱等抗逆性。目前，国际上研究较多的是固氮螺菌(Azospirillumbrasilense)，恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)和根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)。2008年Spaepen通过实验证明巴西固氮 螺菌有改变根形态的作用，表现为该菌产生的IAA显著促进了小麦根毛的形成。恶臭假单胞菌不仅在兰花种子共生萌发中起到了促进作用，而且可以在温室条件下显著促进番茄的产量。2009年B.Ali等从植物根际，叶际中分离出的五种产IAA菌，它们可使小麦幼苗上株高提高29.16％，分蘖数可提高97.35％，穗长提高25.2％，种子重量提高13.7％。已有报道中其它对植株有直接促生效果的产IAA菌还有：嗜麦芽黄单胞菌，蜡状芽胞杆菌，深绿木霉，埃希式菌属，微球菌属，葡萄球菌属等。本发明中提到的球状节杆菌种在1962年由Katznelson等人在Nature上发表文章指出其产IAA和GA特性，但有关该菌属菌种在农作物上的研究应用未见报道。 

发明内容

本发明的目的在于提供一株球状节杆菌新菌株及其应用。 

本发明菌株CNA9是从山东省桓台县小麦实验田中分离得到，已于2010年10月11号在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区大屯路甲3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)保藏，分类命名为球状节杆菌CNA9，保藏号为CGMCCNo.4217。 

CNA9菌株具体的可通过如下方法分离得到： 

从小麦实验田中采集土样，取5g的土溶解到在45ml无菌生理盐水的三角瓶中，28℃、120rpm振荡15min后静止1min，取100μl的上清液加入到装有900μl生理盐水的Eppendorf管中，进行连续梯度稀释，即稀释成10^-2，10^-3，10^-4倍。分别取以上土壤悬浮液和10^-2，10^-3，10^-4倍土壤悬浮液稀释液100μl在NA培养基(牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，NaCl 5g/L，琼脂15g/L)平板上均匀涂板，超净工作台内吹干，每个浓度重复3次，28℃温箱内培养36h，无菌牙签挑取细菌单菌落划线纯化后，接种到含有150mlDF+Trp培养基的500ml容积三角瓶中(蛋白胨5.0g/L，酵母抽提物1.5g/L，牛肉膏1.5g/L， NaCl 5.0g/L，色氨酸0.5g/L)的试管中28℃培养7天后，12000rpm离心5min，取1ml上清液于试管中，加入50μl Solution I(10mM磷酸)及2ml Solution II(1ml 0.5M FeCl₃溶于50ml 35％HClO₄)，混匀后于室温中反应25min，显示红色为产IAA菌株。根据颜色深浅对菌株进行分级，“+++”颜色最深，“++”次之，“+”再次。根据颜色的深浅对产IAA菌进行了初步筛选，对获得的菌株再进行温室促生效果的初步检查，最终筛选出促生性状良好且产IAA量高的菌株CNA9。