[发明专利]一种猪链球菌2型本动物感染模型的构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种猪链球菌2型本动物感染模型的构建方法。

背景技术

猪链球菌(Streptococcus suis，SS)是一种重要的人兽共患病原菌，可侵害各年龄阶段的猪，病猪通常以败血症、脑膜炎、关节炎、淋巴结炎为主要特征。根据猪链球菌的荚膜多糖抗原(CPS)可将其分为35个血清型，其中能引起人和动物发病的致病性猪链球菌血清型主要是1型(SS1)、2型(SS2)、7型(SS7)和9型(SS9)。SS2和SS7都是能够同时感染人和猪的病原菌，该病也属于国家重点防范的人畜共患病之一。

目前国内外对猪链球菌病原、诊断及流行病学等方面的研究已经取得了非常大的进展，但未开发出合适的猪链球菌2型动物模型。动物模型的建立，是研究SS2感染机制、开发和评价疫苗及治疗性药品的基础。国内外有利用小鼠、豚鼠、兔、及斑马鱼等来研究SS2的动物感染模型。但这些动物不能良好地复制出和本源动物或人感染的典型临床症状，不能广泛应用于SS2研究中。而且容易导致对SS2毒力判断的失误，例如临床上对猪表现为低致病力或无致病力的菌株，却可对小鼠表现出强致病力，导致小鼠的死亡。

发明内容

本发明的目的是提供一种猪链球菌2型本动物感染模型的构建方法。

本发明提供的构建猪链球菌2型本动物感染模型的方法，包括如下步骤：在仔猪的口腔上颚扁桃体部位喷雾(喷洒)接种猪链球菌2型，得到猪链球菌2型本动物感染模型。

所述仔猪可为杜×大×长三元杂交猪(即杜洛克猪、大白猪和长白猪的三元杂交猪)仔猪。

所述猪链球菌2型的接种量具体可为10¹⁰cfu(CFU)。

所述仔猪可具体为7周龄的雄性杜×大×长三元杂交猪仔猪。

所述方法还可包括将进行所述接种后的仔猪进行实时荧光PCR鉴定的步骤；所述实时荧光PCR鉴定所用的引物对由序列表的序列1所示的DNA和序列表的序列2所示的DNA组成。

接种后第3至5天作为猪链球菌2型本动物感染模型较好。

本发明有效克服了现有诸多技术问题，成功构建了一种猪链球菌2型本动物感染模型。本发明构建的动物模型可应用于如下领域：模拟人脑膜炎、STSS病程及康复后的遗症；探索不同毒力菌株与猪链球菌疾病进程的关系；全程监测猪链球菌感染动物发病的临床症状、白细胞、超敏反应C蛋白、细胞因子的动态变化；探索hs-CRP和细胞因子等监测指标与致病机理的关系；探索猪链球菌2型致病机理；进行疫苗开发和效果评价；进行抗猪链球菌2型细菌药物的筛选和药品效果评价。

附图说明

图1为应用特异性引物PCR扩增猪链球菌2型基因组DNA的电泳图；1、2：PCR扩增产物；3：DL5000(从下至上依次为100，250，500，750，1000，2000，3000，5000bp)。

图2为猪链球菌2型特异性SYBR GreenI实时荧光定量PCR标准曲线图；A：标准曲线图；B：荧光曲线；C：溶解曲线。

图3为大脑组织病理切片(HE染色，左为40×，右为局部放大)。

图4为肝脏组织病理切片(HE染色，左为20×，右为40×)。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。所有动物试验按照《中国科学院微生物研究所实验动物规范标准与管理制度》及《不同等级实验动物的饲养管理与实验操作》的要求进行。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买所得。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

杜×大×长三元杂交猪(即杜×大×长三元杂交猪即杜洛克猪、大白猪和长白猪的三元杂交猪)：购自北京大兴种猪种禽厂。

猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2，又称猪链球菌血清2型或荚膜2型)：购自中国兽医药品监察所，产品目录号为CVCC1940。

实施例1、猪链球菌2型本动物感染模型的构建

实验动物为7周龄的杜×大×长三元杂交猪仔猪(雄性，体重5.3±0.5kg)。

一、筛选用于建模的实验动物

将实验动物于负压动物房隔离饲养，取血液采用武汉科前动物生物制品有限责任公司“猪链球菌2型ELISA抗体检测盒”进行检测，检测结果为阴性的实验动物用于建模。

二、模型的构建

将步骤一筛选得到的实验动物随机分为2组，每组40头，每头猪分别处理如下：