[发明专利]L27e家族蛋白抗原表位、其抗体及其用途

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学和免疫学，具体涉及一种核糖体蛋白、特别是一种60S核糖体蛋白L27e家族蛋白的抗原表位、其抗体及其用途。

背景技术

核糖体是一切活细胞中(除成熟哺乳动物血细胞外)一个重要的细胞器，主要由RNA和蛋白质构成(核糖体RNA称为rRNA，蛋白质称r蛋白)。在真核细胞中(线粒体与叶绿体的核糖体除外)，核糖体为80S，相对分子量为4800×10³，由60S大亚基和40S小亚基构成。大亚基由28SrRNA、5.8SrRNA、5SrRNA和49种r蛋白构成，小亚基则由18SrRNA和33种r蛋白构成。核糖体会按照mRNA的指令由氨基酸高效且精确地合成多肽链。

越来越多的证据表明，许多种r蛋白除组成核糖体、参与蛋白质生物合成之外，还具有其他功能，如参与复制、转录加工、翻译调控、DNA修复、耐药的形成、自体翻译、细胞凋亡调控、以及正常细胞的恶性转化及发育调控等(Wool I G.Trends.Biochem.Sci，1996，21(5)：164-165；Clemens M J，Oncagene，2004，23：3180-3188；Stoneley M等，Curr.Mol.Med，2003，3：597-603)。陈宏等(国际病理科学与临床杂志，2005，25(5)：393-396)发现肿瘤中核糖体蛋白可以调节癌基因和抑癌基因而参与转录、翻译及凋亡等诸多方面。李沐阳等(中国科学C，2002，32(5)：405-411)发现大肠杆菌核糖体蛋白L24(RPL24)突变体中，B半乳糖苷酶和谷光苷肽巯基转移酶的活性分别下降至野生型菌株的1/4和1/2，并认为RPL24与λN的基因表达可能存在相关，RPL24在翻译的起始和终止过程中以及抵抗病毒方面起到重要作用。Guo等(Proceedings of the National Academy ofSciences，2002，99：7786-7791)在研究一个抗低温的基因CspA过程中发现，此基因能够与核糖体蛋白60S相互作用，并且能够同上游的CBF/DREB1响应因子相互作用。Robe等(Gene，2003，320(27)：41-48)发现用RNA干扰沉默果蝇中的核糖体蛋白L14基因会引起体细胞的异常。但目前有关核糖体和核糖体蛋白的研究主要集中在昆虫、哺乳动物、真菌和细菌，植物方面尤其是水稻方面的研究很少。

水稻是世界上最重要的粮食作物之一，也是植物生长发育、逆境反应等基础研究的模式植物。在水稻中，Os10g0564300基因位于10号染色体，编码136个氨基酸，该蛋白类似大亚基r蛋白L27，属于L27e家族，定义为一个L27e家族蛋白。r蛋白在不同物种之间存在着高度的同源性。在大肠杆菌中，L27是一个核糖体大亚基中r蛋白，对于大亚基的组装有重要作用，它是大亚基单位上P(肽酰位)位点的组成成分，在细胞内蛋白质生物合成中发挥重要作用(Iwona K.Wower，TheJournal of Biological Chemistry，273(31)：19847-19852)。L27e家族蛋白作为核糖体大亚基的构成成分，其表达能够反映出细胞中蛋白合成的情况，也能反映出细胞的生化合成活力，对研究生命活动具有指导意义。研究L27e家族蛋白对揭示水稻蛋白质合成机制和实际生产将具有重要作用。目前关于水稻中L27e家族蛋白的研究很少，而且，目前对水稻L27e家族蛋白的抗体的研究仍为空白。

抗体技术是研究蛋白质功能的有效技术。可以通过制备一个蛋白的抗体来研究该蛋白的表达和功能。传统的抗体制备方法是将抗原注入动物体内，动物体内B淋巴细胞针对抗原产生抗体。由于抗原分子具有多种抗原决定簇(即抗原表位)，每一种决定簇可激活相应抗原受体的B淋巴细胞产生针对某一抗原决定簇的抗体。因此将抗原注入机体所产生的抗体是针对多种抗原决定簇的混合抗体，故称为多克隆抗体。

也可以利用抗原决定簇直接免疫动物获得多克隆抗体。所用抗原决定簇可以利用软件来预测，但有研究表明软件预测抗原决定簇的错误概率较高(Chang HT，Liu CH，Pai TW.Estimation and extraction ofB-cell linear epitopes predicted by mathematical morphologyapproaches.J Mol Recognit.2008 Nov-Dec；21(6)：431-41)，而且软件对全长抗原的抗原决定簇预测存在着特异性问题，还需要实验验证。

发明内容