[发明专利]一种类钙调磷酸酶B亚基蛋白基因及其编码蛋白质和该基因的克隆

权利要求书

1.一种类钙调磷酸酶B亚基蛋白基因，其特征在于：它源于蔷薇科植物的类钙调磷酸酶B亚基蛋白基因，所述的类钙调磷酸酶B亚基蛋白基因的核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO：2的核苷酸序列外显子部分。

2.根据权利要求1所述的类钙调磷酸酶B亚基蛋白基因，其特征在于：所述的类钙调磷酸酶B亚基蛋白基因的核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO：1的核苷酸序列。

3.根据权利要求1或2所述的类钙调磷酸酶B亚基蛋白基因的编码蛋白质，其特征在于：编码蛋白具有序列表SEQ ID NO：3蛋白质活性多肽的氨基酸序列，而且所述的氨基酸序列与SEQ ID NO：1第1～801位的核苷酸序列所编码蛋白质至少有70％的同源性。

4.根据权利要求3所述的类钙调磷酸酶B亚基蛋白基因的编码蛋白质，其特征在于：编码蛋白质的氨基酸序列SEQ ID NO：3是利用BioXM软件对SEQ ID NO：2的核苷酸序列外显子部分或SEQ ID NO：1的核苷酸序列进行翻译后获得；所述的SEQ IDNO：3为含有266个氨基酸残基的蛋白。

5.一种如权利要求1所述的类钙调磷酸酶B亚基蛋白基因的克隆，其特征在于：首先提取蔷薇科植物的基因组DNA，克隆过程中通过上游引物SEQ ID NO：8和下游引物SEQ IDNO：9配对扩增SEQ IDNO：2序列。

6.一种如权利要求2所述的类钙调磷酸酶B亚基蛋白基因的克隆，其特征在于：

利用RACE技术克隆未知基因，具体步骤为：利用上游引物SEQ ID NO：4和下游引物SEQ ID NO：5，以总RNA反转录而来的第一链cDNA为模板，通过RT-PCR获得SEQ ID NO：1序列的保守区片段；

根据SEQ ID NO：1序列的保守区片段的序列信息，设计基因特异上游引物SEQ IDNO：6和基因特异下游引物SEQ ID NO：7，通过基因特异上游引物SEQ ID NO：6与试剂盒中UPM引物配对进行RT-PCR扩增SEQ ID NO：1序列的3′末端序列；通过基因特异下游引物SEQ ID NO：7与试剂盒中UPM引物配对进行RT-PCR扩增SEQ ID NO：1序列的5′末端序列；将得到的SEQ ID NO：1序列的3′和5′末端序列和SEQ ID NO：1序列的保守区片段，进行拼接，最终获得PcCBL的cDNA全长；

所述的试剂盒为SMARTer^TM RACE cDNA Amplification Kit。