[发明专利]一种检测马立克氏肿瘤的方法无效
| 申请号： | 201010513691.7 | 申请日： | 2010-10-21 |
| 公开（公告）号： | CN102453750A | 公开（公告）日： | 2012-05-16 |
| 发明（设计）人： | 吴红云;李建正;郭俊清 | 申请（专利权）人： | 郑州后羿制药有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 郑州睿信知识产权代理有限公司 41119 | 代理人： | 胡泳棋 |
| 地址： | 451161 河南省*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 马立克氏 肿瘤 方法 | ||
1.一种检测马立克氏肿瘤的方法，其特征在于：所述的检测方法包括以下步骤：
1）分离样品抗凝血液中的淋巴细胞；
2）提取淋巴细胞中的基因组DNA；
3）设计微卫星引物；
4）PCR扩增目的片段；
5）对PCR产物进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。
2.根据权利要求1所述的检测马立克氏肿瘤的方法，其特征在于：步骤1）所述的淋巴细胞分离方法为：先将淋巴分离液加于试管底部，然后沿试管壁加入抗凝血液，低速离心，吸取中间层到另一干净于试管中，冷冻保存。
3.根据权利要求2所述的检测马立克氏肿瘤的方法，其特征在于：所述的淋巴分离液与抗凝血液体积比为2：1。
4.根据权利要求1所述的检测马立克氏肿瘤的方法，其特征在于：步骤4）所述的PCR扩增的体系为：模板：1μL，Taq DNA聚合酶：0.4μL，上、下游引物各1μL，dNTP：2μL，10×buffer：2.5μL，最后蒸水补足25μL。
5.根据权利要求1所述的检测马立克氏肿瘤的方法，其特征在于：步骤4）所述的PCR扩增采用降落PCR，PCR扩增的程序为：
94℃预变性5min；
94℃变性30 s；
55℃退火30 s；
50℃退火30 s；
45℃退火30 s；
68℃ 30 s
72℃ 7min；
前两步退火温度各10个循环，最后一步退火为15个循环。
6.根据权利要求1所述的检测马立克氏肿瘤的方法，其特征在于：步骤5）所述的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的浓度为12%，所述的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的变性剂为尿素。
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