[发明专利]帕曲星A的分离方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种帕曲星A的分离方法。

背景技术

1971年Tiberio Bruzzese等从土壤样品中分离纯化得到一株链霉菌属的生金链霉菌(Streptomyces aureofaciens)，并在该菌的代谢产物中分离出了一种七烯大环内酯类抗生素，命名为帕曲星(partricin)。帕曲星是一种抗真菌和抗原虫的高效药，通过抑制真菌细胞细胞膜的合成实现抑菌作用，尤其对白色念珠菌具有极高的抑菌活性。帕曲星主要包含两种组分，帕曲星A和帕曲星B。

生金链霉菌发酵产物中，除产物帕曲星外，还同时生成大量的四环素和金霉素等其他种类的抗生素及杂质，成分十分复杂，因此从发酵产物中提取帕曲星A的工艺繁琐。目前，现有技术中对帕曲星A的分离纯化主要还是采用传统的有机溶剂萃取和活性炭吸附等方法。

美国专利3,773,925中阐述了帕曲星A的分离纯化过程。主要利用的是帕曲星A在不同溶剂中溶解度的差异，多步骤的反复萃取后，再利用活性炭吸附进行富集纯化。该方法的缺点是采用了大量的溶剂，对环境造成很大的压力，且步骤中不可避免的需要采用活性炭，而活性炭的吸附性能并不是很稳定，即使同一个生产厂家生产的活性炭，生产批次的不同，因而会造成最终产品的质量不稳定。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服了现有分离帕曲星A方法使用大量溶剂对环境造成很大的压力，步骤中不可避免的需要采用活性炭，而活性炭的吸附性能不稳定会造成最终产品的质量不稳定的缺陷，提供了一种操作简单，成本较低，不会产生过多溶剂造成环境压力，产品质量稳定，适合大规模工业化生产的帕曲星A的分离方法。

本发明的帕曲星A的分离方法包括如下步骤：

(1)将含帕曲星发酵液调pH为3～5，静置并过滤，将滤饼用极性有机溶剂浸泡，之后过滤取滤液；

(2)将滤液调pH为9～10，之后于25℃～35℃下浓缩至溶液含水体积百分比30％～35％，静置，过滤得帕曲星粗品；

(3)将帕曲星粗品溶解于含水体积百分比25％～30％的甲醇溶液，之后上样苯乙烯大孔反相吸附树脂柱，先用含水体积百分比18％～23％的甲醇溶液洗脱除杂，然后再用含水体积百分比13％～17％的甲醇溶液洗脱帕曲星A，收集纯度≥80％的帕曲星A洗脱液；

(4)将收集的帕曲星A洗脱液浓缩至溶液为含水体积百分比25％～30％的甲醇溶液，再上样苯乙烯大孔反相吸附树脂柱，用含水体积百分比17％～19％的甲醇溶液洗脱除杂，再用含水体积百分比10％～14％的甲醇溶液洗脱帕曲星A，收集洗脱液即可。

下面，进一步的对本发明的帕曲星A的分离方法进行详细介绍：

(1)将含帕曲星发酵液调pH为3～5，静置并过滤，将滤饼用极性有机溶剂浸泡，之后过滤取滤液。

其中，所述的含帕曲星发酵液为本领域常规制备帕曲星的微生物菌发酵液，一般由生金链霉菌Streptomyces aureofaciens经过本领域常规方法发酵培养获得。所述的生金链霉菌具体菌种没有特殊限定，常规能够生产帕曲星的菌种均可使用，如生金链霉菌Streptomyces aureofaciens NRRL 3878等。其中，所述的生金链霉菌经培养发酵获得含帕曲星发酵液具体菌种不受限定是因为帕曲星是生金链霉菌Streptomyces aureofaciens的次级代谢产物，不同的具体菌株虽然在帕曲星的产量、杂质的比例上有所不同，但发酵液的主要成分相对固定，因此不同具体菌种生金链霉菌Streptomyces aureofaciens制备的发酵液均适用本发明方法。

其中，所述的调pH试剂为本领域常规调pH的酸，较佳的为草酸和/或盐酸，更佳的为草酸。

其中，所述的静置的作用为充分除去发酵液中的活菌，所述的静置的时间较佳的为≥2小时，更佳的为2～4小时。

其中，所述的极性有机溶剂为本领域常规所述极性有机溶剂，较佳的为甲醇、乙醇和丙酮中的一种或多种，更佳的为甲醇。

其中，所述的极性有机溶剂的用量较佳的为2～4倍滤饼体积。

其中，所述的浸泡的作用是充分提取滤饼中的帕曲星。所述的浸泡的时间较佳的为≥2小时，更佳的为2～4小时。

其中，所述的浸泡以及过滤操作较佳地还可以重复操作1～2次，之后合并滤液。

(2)将滤液调pH为9～10，之后于25℃～35℃下浓缩至溶液含水体积百分比30％～35％，静置，过滤得帕曲星粗品。