[发明专利]一种显微注射针用缓冲柱的制备方法及其制备的缓冲柱

说明书

技术领域

本发明属于生物工程领域，涉及显微受精，尤其涉及一种显微注射针用缓冲柱的制备方法及其制备的缓冲柱。

背景技术

显微受精被广泛地应用于基础的生殖研究和人的辅助生殖技术中来治疗不孕症。从历史上讲，在哺乳动物，显微受精最早开始于金黄地鼠；自此之后，显微受精对于哺乳动物受精机制的研究提供了无价的信息。

由于动物基因工程和生殖技术的进步，现在，显微受精技术已经被广泛的使用，来鉴别特定基因在生物学上的意义或证实在体外通过实验操作后的配子其基因的正常形态。

显微操作工具尤其是注射针的配置是影响显微受精的重要因素。

发明内容

本发明的目的在于提供一种简单、实用的显微注射针用缓冲柱的制备方法。

本发明提供的显微注射针用缓冲柱的制备方法，主要包括步骤：

1)从显微注射针的后端注入水银，使水银柱在显微注射针针管中长度为2～3mm；

2)用注射器把显微注射针中的水银柱推至显微注射针针管的前端；

3)在低倍显微镜下调整显微注射针针管的位置与角度，降低显微注射针的位置至石蜡油中，吹出水银柱前端残留空气，用油洗尖端数次；

4)把显微注射针移到聚乙烯吡咯酮(PVP)液滴中，抽吸水银柱3～5次，使聚乙烯吡咯酮液进入显微注射针的针管润滑针管内壁，直到水银在针管内平滑地移动且没有时间延迟；

5)吸取聚乙烯吡咯酮液进入显微注射针内用于显微注射针的压力缓冲，把显微注射针移至聚乙烯吡咯酮滴外的石蜡油中，吸取石蜡油密封聚乙烯吡咯酮柱，形成所述缓冲柱。

所述步骤4)所述聚乙烯吡咯酮液是浓度为10％的聚乙烯吡咯酮液。

本发明提供的聚乙烯吡咯酮液，其包含聚乙烯吡咯酮和D-PBS缓冲液。10％聚乙烯吡咯酮液包含聚乙烯吡咯酮和D-PBS缓冲液，其中聚乙烯吡咯酮和D-PBS缓冲液的比例为1g聚乙烯吡咯酮∶10ml D-PBS缓冲液。所述10％聚乙烯吡咯酮液通过下述方法制备：将1g聚乙烯吡咯酮倒入10ml D-PBS液中溶解而成。

所述的聚乙烯吡咯酮液可以用于制备显微注射针用缓冲柱。

本发明还提供通过上述方法制备的显微注射针用缓冲柱。

本发明提供的缓冲柱的制备方法简单、实用，且制备的缓冲柱的缓冲效果优良。

为让本发明的上述和其它目的、特征和优点能更明显易懂，下文特举较佳实施例，并配合附图，作详细说明如下。

附图说明

图1是吹出注射针内水银柱前端残留空气的示意图；

图2是使PVP液进入针管润滑针管内壁的示意图；

图3是形成的缓冲柱的示意图。

具体实施方式

用一根前端细长的水银塑料吸管吸取1～ul水银，把水银吸管前端细长的部分从注射针1后端伸入进注射针1在离注射针1段1.0～.5cm的位置缓慢吹出吸管内的水银，使水银柱在注射针1针管中长度在2～mm之间即可。

用微注射器加上一定的正压，把注射针中的水银柱推至注射针1针管的前段，在低倍显微调整注射针1针管的位置与角度降低注射针1位置至石蜡油中，吹出水银柱前端残留空气，用油洗尖端数次(图1)，然后把注射针1移到10％PVP液滴中(10％PVP液包含PVP和D-PBS缓冲液，其中PVP和D-PBS缓冲液的比例为1g PVP∶10ml D-PBS缓冲液。所述10％PVP液通过下述方法制备：将1g PVP倒入10ml D-PBS液中溶解而成)，抽吸水银柱3～5次，使PVP液进入针管润滑针管内壁，直到水银能在管内平滑地移动且没有滞后感(时间延迟)，注意要将吸附在管内的油完全去除(图2)。

吸取一定体积的PVP液进入注射针1内用于注射针1的压力缓冲，移动载物台，把注射针1移至PVP滴外的石蜡油中，吸取一定量的石蜡油密封PVP柱，既起到缓冲作用也防止水银污染显微操作液(图3)。

虽然本发明已以较佳实施例披露如上，然其并非用以限定本发明，其中任何所属技术领域的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，当可作些许的更动与改进，因此本发明的保护范围当视权利要求所界定者为准。