[发明专利]一种非有机溶剂提取虎杖中白藜芦醇苷的方法

说明书

一、技术领域

中药制备领域，具体来说本发明是一种用非有机溶剂(碱法)提取虎杖中白藜芦醇苷的方法。

二、背景技术

目前国内对虎杖中自藜芦醇(苷)的提取方法主要有有机溶剂提取法(包括酶解法、自然发酵法、超临界萃取法及用超声波、微波辅助提取法)和碱提酸沉法两类，目前国内生产中主要采用有机溶剂提取法，具体做法主要有两种：一是将虎杖粉碎、用有机溶剂(甲醇、乙醇、乙酸乙酯等)提取、分离、滤液浓缩、纯化等工序获取白藜芦醇苷，再经酶解或酸解制取自藜芦醇。此法会导致原有的部分白藜芦醇丢失。另一种方法是采用专一酶或筛选专一性微生物将虎杖发酵或将虎杖自然发酵，使白藜芦醇苷转化为白藜芦醇，然后再用有机溶剂提取、纯化。此法虽然避免了虎杖原有白藜芦醇的损失，但操作繁琐，成本较高。目前国内所开发的碱提酸沉法均为直接提取白藜芦醇，与有机溶剂法相比，此法不需要使用有机溶剂，可降低提取成本。但虎杖中的白藜芦醇绝大多数是以苷形式存在，而游离的白藜芦醇较少，故直接提取法的白藜芦醇提取率均很低；其次，调节溶液pH很难使白藜芦醇充分沉淀，故收率很低，只有0.62％。

三、发明内容

本发明的目的是提供一种提取时不用有机溶剂、纯化方法简便易行、且纯化效率高、产品得率高、成本低、减轻环境污染的虎杖中自藜芦醇苷提取方法。

本发明是这样实现的：虎杖经粉碎、碱液提取、酸沉除杂、减压浓缩、醇沉除杂、加水溶解、大孔树脂纯化即得纯度在98％以上的白藜芦醇苷产品。

本发明技术要点是：

1、提取：将虎杖粉碎成细粉，用1∶12～1∶20的料液比加0.1～0.5mol/L氢氧化钠水溶液冷浸过液，然后在60～98℃下浸提30～90min，过滤除渣，重复提取2～3次，合并滤液。

2、酸沉除杂：在搅拌下向滤液中加6mol盐酸将pH调至3～6，静置后在3000～4000转/min离心5～15min分离得清液。

3、减压浓缩：将所得清液在60～85℃下减压浓缩至1/50～1/40。

4、醇沉：在快速搅拌条件下，向浓缩液中缓慢加入95％工业乙醇，至混合液酒精浓度达80％，静置过夜，真空抽滤得滤液。再在60～80℃下减压浓缩回收乙醇。加4～5倍热水(70～80℃)溶解，冷却。

5、大孔树脂纯化：选用XDA-8大孔树脂，用95％乙醇浸泡24h，湿法装柱，用无离子水洗去乙醇，平衡后上样，速度为4BV/h，然后用热无离水洗脱至无色，再用70％乙醇洗脱，洗脱速度为1～2BV/h，收集洗脱液，减压浓缩，静置过夜，真空抽滤、真空干燥，即得白藜芦醇苷精品。

本发明具有如下优点：

1、用碱性水替代有机溶剂进行提取，从而大大降低生产成本，减轻环境污染。

2、改变传统酸沉收集沉淀物，再从沉淀物中分离提取产品白藜芦醇的做法。本发明则是收集酸沉的上清液(白藜芦醇苷仍保持溶解状态，而有机酸、黄酮等杂质沉淀)，再从上清液中分离提取白藜芦醇苷，使后期纯化操作更易于进行，大大提高了白藜芦醇苷的得率，即白藜芦醇苷得率平均在4.0％以上，提取率平均达91.2％以上，从而克服了传统碱提酸沉法白藜芦醇沉淀不完全，且收集物中杂质含量高，难于纯化的缺陷。

3、本发明对酸沉所得上清液经减压浓缩、醇沉除杂，回收乙醇，热水溶解后，直接上大孔树脂，一次性分离得到高纯度产品白藜芦醇苷，简化了纯化操作。

四、具体实施方式

实例1：按料液比1∶15在100g虎杖粉末中加入浓度为0.25mol/L的氢氧化钠水溶液1500ml，在98℃水浴中浸提30min，连续提取2次，过滤后合并滤液。在滤液加6mol/L的盐酸调节pH至6.0，静置后在3500转/min离心10min分离得清液。将所得清液在70℃下减压浓缩至1/40。在快速搅拌条件下，向浓缩液中缓慢加入95％工业乙醇，至混合液酒精浓度达80％，静置过夜，真空抽滤得滤液。再在70℃下减压浓缩回收乙醇。加4倍80℃热水溶解，冷却。选用XDA-8大孔树脂，用95％乙醇浸泡24h，湿法装柱，用无离子水洗去乙醇，平衡后上样，速度为4BV/h，然后用热无离水洗脱至无色，再用70％乙醇洗脱，洗脱速度为2BV/h，收集洗脱液，减压浓缩，静置过夜，真空抽滤、真空干燥，即得白藜芦醇苷精品。用此法产品白藜芦醇苷的得率为2.45％，纯度为97％。

实例2：按料液比1∶15在100g虎杖粉末中加入浓度为0.50mol/L的氢氧化钠水溶液1500ml，冷浸过夜，在80℃水浴中浸提60min，连续提取3次，过滤后合并滤液。滤液加6mol/L的盐酸调节pH至6.0，静置后在3500转/min离心10min分离得清液。将所得清液在70℃下减压浓缩至1/40。在快速搅拌条件下，向浓缩液中缓慢加入95％工业乙醇，至混合液酒精浓度达80％，静置过夜，真空抽滤得滤液。再在70℃下减压浓缩同收乙醇。加4倍80℃热水溶解，冷却。选用XDA-8大孔树脂，用95％乙醇浸泡24h，湿法装柱，用无离子水洗去乙醇，平衡后上样，速度为4BV/h，然后用热无离水洗脱至无色，再用70％乙醇洗脱，洗脱速度为2BV/h，收集洗脱液，减压浓缩，静置过夜，真空抽滤、真空干燥，即白藜芦醇苷精品。用此法的产品白藜芦醇苷的得率为2.85％，纯度为98.4％。