[发明专利]一种野牛草ISSR-PCR分子标记体系无效
| 申请号： | 201010520022.2 | 申请日： | 2010-10-20 |
| 公开（公告）号： | CN101985655A | 公开（公告）日： | 2011-03-16 |
| 发明（设计）人： | 张蕴薇;杨富裕;魏小兰;邓波;康俊梅;沈紫微;邓由飞 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王加岭;张庆敏 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 野牛 issr pcr 分子 标记 体系 | ||
【权利要求书】：
1.一种野牛草ISSR-PCR反应体系，其特征在于，每25μL的反应体系中含有1×PCR缓冲液，dNTP 0.3mM，Taq酶1.0U，引物0.6μM，Mg2+ 2.0mM，DNA模板50ng；将上述反应混合液按如下程序进行扩增：
94℃预变性3min，94℃变性30s，50～60℃退火30s，72℃延伸2min，循环35次，72℃再延伸4min。
2.根据权利要求1所述的ISSR-PCR体系，其特征在于，所述的引物选自SEQ ID No.1～7中的任一条。
3.根据权利要求1所述的ISSR-PCR体系，其特征在于，所述退火温度根据所选择的引物来确定，具体如下：
SEQ ID No.1 52.8℃
SEQ ID No.2 49.9℃
SEQ ID No.3 57.7℃
SEQ ID No.4 49.9℃
SEQ ID No.5 57.7℃
SEQ ID No.6 48.8℃
SEQ ID No.7 57.7℃。
4.根据权利要求1～3任一项所述的ISSR-PCR体系在野牛草遗传多样性评价和分子标记辅助育种中的应用。
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