[发明专利]一种耧斗菜族植物中提取纯化木兰花碱的工艺

说明书

技术领域：

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种耧斗菜族植物中提取纯化木兰花碱的工艺，具体来说是一种膜浓缩和大孔树脂氧化镁混合柱层析结合提取纯化木兰花碱的方法。

背景技术：

木兰花碱(Magnoflorine)，又称唐松草碱，玉兰碱，洋玉兰碱等：

分子式：C₂₀H₂₄NO⁴⁺；分子量：342.41。

耧斗菜族植物属植物隶属毛莨科(Ranunculaceae)唐松草亚科(Thalictroideae)全草入药，具有痛经活血的功效，民间用于治疗月经不调、妇女血分病等症。耧斗菜族植物属植物在我国有8属30多种，资源丰富，大都含有多种生理活性物质。尖萼耧斗菜Aquilegia oxysepalaTrautv.et Mey.的流浸膏(名“血见愁”膏)治疗月经不调、功能性子宫出血等妇科疾病；天葵Semiaquilegia adoxoides(DC.)Mak.有较长的使用历史，广西桂林用天葵全草水煎液治疗室上性心动过速并发心源性休克阵发性室性早搏及心肌梗死等严重心脏疾病，疗效显著。其主要化学成分有酚酸类、有机酸类、黄酮类、皂苷类和生物碱类。药理研究表明其具有保肝、抗菌、免疫抑制、细胞毒作用，具有潜在的药用价值。目前我国学者对这类群植物的研究及开发利用较少，主要还在化学成分分离鉴定方面，对其活性成分的提取纯化方面研究较少。

发明内容：

本发明要解决的技术问题是提供一种耧斗菜族植物中提取纯化木兰花碱的工艺，该工艺生产木兰花碱周期短、能耗低，制备量大，适合规模化生产。

本发明技术方案如下：

一种耧斗菜族植物中提取纯化木兰花碱的工艺，其特征在于包含以下步骤：

a.提取：取干燥耧斗菜族植物全草，粉碎，加入4-12倍量酸性水溶液，加热至50-80℃，提取2-5次，每次1-3小时，合并提取液；

b.过滤：将上述提取液用微滤膜滤过，再加入超滤膜系统超滤，最后通过纳滤膜系统纳滤，收集浓缩液；

c.萃取：将上述浓缩液加入碱水溶液调节pH至7.5-11，加入乙酸乙酯萃取3-6次，合并乙酸乙酯萃取液；

d.柱层析：将上述乙酸乙酯萃取液回收试剂至浸膏状，加入大孔树脂-氧化镁混合层析柱，石油醚-乙酸乙酯-甲醇混合溶液洗脱，TLC监测，收集木兰花碱流分，回收试剂，得粗晶物；

e.重结晶：将上述粗晶物滤出，加入正己烷-丙酮回流溶解，冷却，结晶，滤出干燥即得产品。

所述步骤a.中的酸性水溶液可选0.5-15％的盐酸、醋酸、磷酸水溶液中的一种。

所述步骤b.中膜过滤中的膜，材料为聚醚砜膜、聚砜膜、聚偏氟乙烯膜、聚丙烯腈或聚酰胺膜；微滤膜孔径为0.2-0.45μm，超滤膜截留分子量为2000-10000KD，纳滤膜截留分子量为200-400KD，过滤压力为0.2-0.5Mpa。

所述步骤c.中乙酸乙酯每次加入量为浓缩液体积的1/3-4/5。

所述步骤d.中大孔树脂和氧化镁的质量比为1∶5-7∶1，大孔树脂可选HP-20、LD605、D180、XSD-3等中的一种，氧化镁为100-200目的氧化镁。

所述步骤d.中洗脱液石油醚-乙酸乙酯-甲醇体积比为3-6∶4-8∶3-6。

所述步骤e.中重结晶溶剂正己烷-丙酮体积比为1∶1。

本发明积极效果：

本发明采用超滤膜和纳滤膜除杂浓缩，减少了有机溶剂萃取用量，同时使柱层析前的样品液得以净化，减轻对填料的损害，延长使用寿命；大孔树脂和氧化镁混合层析柱上样量大、分离效果好，本发明属于能耗低、专属性强的生产木兰花碱的工艺。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

实施例1：

实施例1：