[发明专利]一种检测原料乳中蜡样芽孢杆菌的方法

权利要求书

1.一种检测原料乳中蜡样芽孢杆菌的方法，其特征在于：检测原料乳中蜡样芽孢杆菌的方法按以下步骤实现：一、将待检测的原料乳离心进行脱脂；二、将脱脂乳与EDTA-Na溶液以5-7∶1的比例向脱脂乳中加入体积浓度为60％的EDTA-Na溶液，在37℃的温度下水浴20-30min；三、将水浴后的样品进行无菌过滤；四、用生理盐水洗脱滤膜上的菌体，离心2次后弃掉上清，收集菌体；五、利用细菌DNA提取试剂盒提取菌体基因组DNA作为模板，进行Real TimeRT-PCR检测，根据扩增曲线和融解曲线进行分析；即得到检测结果；其中步骤五中20ul反应体系由10ul的2×SYBR buffer、2.0ul的DNA模板、1.0ul的引物和7.0ul的灭菌双蒸水组成；扩增反应条件为预变性95℃30s，变性95℃5s，退火60℃35s，共40个循环；蜡样芽孢杆菌上游引物为5’-AGTTCGTAGCCTATGCCGT-3’，下游引物为5’-GGCTTATTCGCTATGCG-3’。

2.根据权利要求1所述的一种检测原料乳中蜡样芽孢杆菌的方法，其特征在于：步骤一中待测样品是在3000g的条件下离心20min。

3.根据权利要求1所述的一种检测原料乳中蜡样芽孢杆菌的方法，其特征在于：步骤二中将脱脂乳与EDTA-Na溶液以6∶1的比例向脱脂乳中加入体积浓度为60％的EDTA-Na溶液。

4.根据权利要求1所述的一种检测原料乳中蜡样芽孢杆菌的方法，其特征在于：步骤二中水浴条件为37℃，25min。

5.根据权利要求1所述的一种检测原料乳中蜡样芽孢杆菌的方法，其特征在于步骤三中采用0.22um孔径的蔡氏过滤器进行无菌过滤。

6.根据权利要求1所述的一种检测原料乳中蜡样芽孢杆菌的方法，其特征在于：步骤四中菌体洗脱液在9000g，15min的条件下离心2次。

7.根据权利要求1所述的一种检测原料乳中蜡样芽孢杆菌的方法，其特征 在于；步骤五中利用细菌DNA提取试剂盒提取菌体基因组DNA。

8.根据权利要求1所述的一种检测原料乳中蜡样芽孢杆菌的方法，其特征在于：步骤五中提取的菌体DNA直接作为Real Time RT-PCR反应的模板。