[发明专利]一种检测β-内酰胺类抗生素的试剂盒及方法有效
申请号: | 201010521854.6 | 申请日: | 2010-10-21 |
公开(公告)号: | CN102455361A | 公开(公告)日: | 2012-05-16 |
发明(设计)人: | 何方洋;万宇平;冯才伟;冯静;汪善良;罗晓琴;何丽霞;赵正苗;冯才茂;崔海峰;李勇;王建霞 | 申请(专利权)人: | 北京勤邦生物技术有限公司 |
主分类号: | G01N33/577 | 分类号: | G01N33/577;G01N33/558 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 检测 内酰胺 抗生素 试剂盒 方法 | ||
技术领域
本发明涉及一种检测β-内酰胺类抗生素的试剂盒及方法。
背景技术
随着人们生活水平的提高,动物源食品中的药物残留日益受到国际社会的重视。β-内酰胺类抗生素作为发现最早、用量最多的一类抗生素,在牛乳及动物组织中残留检出报道最多。β-内酰胺类抗生素是指化学结构中含有β-内酰胺环的一类抗生素,主要包括青霉素类和头孢菌素类,其作用特点是能够抑制细菌黏肽转肽酶的活性,从而阻止细菌细胞壁的合成,呈现杀菌活性。在动物生产中,β-内酰胺类抗生素广泛用于控制奶牛的乳房炎,治疗动物尿道、胃肠道和呼吸道感染等。但由于其使用方法不当或不遵守休药期规定等原因,均可造成它在畜产品中的残留,给人类健康带来严重危害,如产生过敏反应、破坏胃肠道菌群平衡和增强细菌耐药性等。其中青霉素在食品中的残留会对青霉素过敏的人产生健康危害,更为重要的是,抗生素被过量食入健康人肠道,会破坏健康人的正常菌群环境,导致人体免疫力的降低,从而危害消费者的身体健康,同时也影响牛奶及乳制品的出口贸易。我国的原料乳中β-内酰胺类抗生素残留严重,对其开展监控检测是我国乳品业发展中极为关注的问题。为使牛奶中抗生素问题得到有效监控,符合最大残留限量标准,奶牛场、乳制品厂、政府监督部门、出入境检测、大型食品流通领域等都在努力寻求准确可行的检测方法,许多大型化学试剂和仪器公司也致力于开发β-内酰胺类抗生素残留检测的方法和仪器。
目前,牛奶及生鲜奶中β-内酰胺类抗生素残留的检测方法依据不同的检测原理,大体可分为三大类:微生物受阻检测、理化检测法、免疫学分析法。微生物受阻检测方法,主要有抑菌圈试验、浑浊度试验、变色型检测金标试剂盒方法,微生物检测方法检测成本价低,但是灵敏度低、耗时长、耐药菌的存在容易导致误检;理化检测方法,是目前检测β-内酰胺类抗生素主要方法,有液相色谱法、色谱/质谱联用技术、气相色谱法等,理化检测方法精确度高,但其存在检测成本高,检测设备复杂,对检测人员的要求较高,检测耗时长等缺点,目前常用的免疫学分析法,主要为酶联免疫检测法和放射免疫分析法需要的检测费用还是较高,不适合企业低成本的检测需要。
中国发明专利200810162588.5(CN101429241A)中公开了“青霉素与载体蛋白偶联产物和β-内酰胺类青霉素抗体制备的方法及用途”,该方法中的青霉素单克隆抗体制备的酶联免疫试剂盒仅能检测青霉素G、氨苄青霉素、羧苄青霉素三种β-内酰胺类抗生素,制备的胶体金试纸条检测灵敏度低,检测药物种类少。因此,在实践中有必要建立一种敏感度高、操作简单、成本低、检测药物种类多、适合大规模推广的检测方法。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种检测β-内酰胺类抗生素的试剂盒。
本发明所提供的试剂盒包括微孔试剂和试纸,微孔试剂具有微孔塞,试纸包括底板、样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜,其依次连接;所述微孔试剂中冻干有头孢类药物特异性抗体-胶体金标记物;头孢类药物特异性抗体可为头孢类药物单克隆抗体或头孢类药物多克隆抗体;反应膜上包被有检测区和质控区;当头孢类特异性抗体为头孢类药物单克隆抗体时,检测区包被有头孢类药物-载体蛋白偶联物,质控区包被羊抗鼠抗抗体;当头孢类药物特异性抗体为头孢类药物多克隆抗体时,检测区包被头孢类药物-载体蛋白偶联物,质控区包被羊抗兔抗抗体。
所述保护膜粘贴在试纸两端,其中一端粘贴在样品吸收垫上,为检测端,上面有MAX标记线,另一端粘贴在吸水垫上为手柄端。
所述检测区位于近于有MAX标记的保护膜的一侧,所述质控区位于远离所述有MAX标记线的保护膜的一侧。
所述头孢类药物-载体蛋白偶联物是由头孢类药物与载体蛋白偶联得到,所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。
所述头孢类药物特异性抗体-胶体金标记物中的头孢类药物特异性抗体是以头孢类药物-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得。
所述底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料;样品吸收垫可为吸滤纸或虑油纸;吸水垫为吸水纸;反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜;吸水垫为吸水纸;保护膜为PE材质保护膜。
本发明的另一个目的是提供了一种制备上述试剂盒的方法,其包括步骤:
1)制备冻干有头孢类药物特异性抗体-胶体金标记物的微孔试剂;
2)制备具有包被头孢类药物-载体蛋白偶联物的检测区和包被抗抗体的质控区的反应膜;
3)将2)制备好的反应膜与样品吸收垫、吸水垫、保护膜、底板组装成试纸;
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