[发明专利]一种测定中药抗氧化活性的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种以伏安法测定中药抗氧化活性的方法。

背景技术

(1)常用的抗氧化模型

根据作用机理，天然抗氧化剂一般可分为四类：1)氧自由基清除剂：直接清除氧自由基；2)酶抑制剂：抑制参与氧自由基产生的酶的活性；3)金属离子螯合剂：络合在氧自由基产生过程中起重要作用的过渡金属；4)其他。目前，评价中药抗氧化活性的方法有很多，主要有自由基清除法，如1，1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)法、Oxygen radical absorbance capacity(ORAC)法、超氧阴离子清除法、羟基自由基清除法和脂质自由基清除法等。由于诱导剂的不同，自由基的产生机理不同，抗氧化试验结果极易受实验条件的影响，尤其是那些以生物实验为基础的方法，由于操作烦琐，加上生物实验不确定因素相对增加，使得实验结果往往对实验条件有很强的依赖性。中药中不乏优良的抗氧化剂，但其化学成分的复杂性使得很难用现有方法对其抗氧化活性进行评价。

(2)伏安法评价中药抗氧化活性的理论基础及实验数据

氧自由基清除剂的抗氧化作用多是通过电子转移清除氧自由基，给电子的能力越强，其抗氧化活性应越强，氧化电位是物质给电子能力的指标，也应是其清除氧自由基能力的指标。已有文献报道，黄酮类化合物及酚酸类化合物的电位与其抗氧化活性密切相关。如van Acker等以循环伏安法测定了黄酮化合物在2.5％二甲基亚砜缓冲溶液中的氧化电位，同时以鼠肝及脑微粒体脂质过氧化体系为模型，以doxorubicin及Fe²⁺/ascorbate为诱发剂，评估了这些黄酮类化合物对脂质过氧化的抑制率，结果表明黄酮类化合物脂质过氧化抑制率与氧化电位之间有较好的定性关系，即氧化电位较低的物质其脂质过氧化抑制率较高(van Acker S.A.B.E.，van den Berg D.-J.，Tromp M.N.J.L.，et al.，Free Radic.Biol.Med.，1996，20，331)。其后，他们以azobisamidinopropane(ABAP)为诱发剂诱发脂质过氧化，结果在黄酮类化合物脂质过氧化抑制率与氧化电位之间也得到了良好的线性关系(van Acker S.A.B.E.，van Balen G.P.，van den Berg D.-J.，et al.Biochem.Pharmacol.，1998，56，935)。杨滨等采用流动柱电极电解体系对29个常见于中药中的黄酮化合物进行了研究，考察了它们在生理pH值范围内的电极反应类型，测定了氧化电位及电子转移数(Bin Yang，Kensuke Arai，and Fumiyo Kusu.Electrochem.，2001，69，519)，同时建立了以Fe³⁺/ADP-NADPH为诱导剂的鼠肝微粒体脂质过氧化模型，评价了这些黄酮化合物在此模型中的抗氧化活性(Bin Yang，Akira Kotani，Kensuke Arai，and Fumiyo Kusu Chem.Pharm.Bull.，2001，49，747，Bin Yang，Kensuke Arai，and Fumiyo Kusu.Anal.Sci.，2001，17，599)，结果表明，黄酮类化合物脂质过氧化抑制率与氧化电位之间有良好的线性关系。Peyrat-Maillard等采用HPLC-库仑阵列检测技术，对酚酸类化合物的电位值进行了测定，同时考察了它们抑制甲基亚油酸酯在无水十二烷中的加速自氧化能力及消除DPPH自由基的能力，结果表明电位与清除自由基之间有良好的线性关系(M.N.Peyrat-Maillard，et al.，Talanta，2000，51，709)。

发明内容

不同于单体化合物，中药是由无数个单体化合物组成的，正是由于中药成分复杂，目前未见将伏安法直接用于中药抗氧化活性的研究。本发明经过大量研究表明，氧化电位值反映了所测中药中化合物给电子的能力，氧化电流值则代表能给出电子的化合物的量，因此，采用伏安法测定中药的氧化电位和电流值，将两者结合起来测定中药的抗氧化活性。下面进一步详述本发明。

(1)以伏安法对十种中药的抗氧化活性进行预测，并与它们清除DPPH自由基的活性进行对比。