[发明专利]一种蛋白分泌表达载体构建及其应用

权利要求书

1.一种gp67信号肽序列，其特征在于具有SEQ ID NO：1所示的序列。

2.一种分泌型杆状病毒供体质粒pFastBacgp67，其特征在于所述供体质粒以pFastBacI杆状病毒表达载体为基础，在其多克隆位点之间连接有权利要求1所述的gp67信号肽序列。

3.权利要求2所述的分泌型杆状病毒供体质粒pFastBacgp67，其特征在于所述多克隆位点为BssHII和MfeI。

4.一种制备权利要求2所述的分泌型杆状病毒供体质粒pFastBacgp67的方法，包括将权利要求1所述的gp67信号肽序列插入到pFastBacI杆状病毒表达载体的多克隆位点中。

5.权利要求4所述的方法，其特征在于所述多克隆位点为BssHII和MfeI。

6.一种外源蛋白表达系统，包括权利要求2所述的分泌型杆状病毒供体质粒pFastBacgp67、Bacmid穿梭载体、辅助质粒和昆虫细胞。

7.权利要求6所述的外源蛋白表达系统，其中所述昆虫细胞包括Sf9昆虫细胞、Sf21昆虫细胞或High 5昆虫细胞。

8.一种利用权利要求6所述的外源蛋白表达系统生产外源蛋白的方法，包括以下步骤：

(1)将编码所述外源蛋白的基因插入到分泌型杆状病毒供体质粒pFastBacgp67中，以得到重组载体质粒；

(2)用步骤(1)制备的重组载体质粒转座DH10Bac感受态细胞并且提取重组Bacmid DNA；

(3)以步骤(2)制备的重组Bacmid DNA转染昆虫细胞以获得重组病毒；

(4)以步骤(3)所获得重组病毒感染昆虫细胞并培养；

(5)收获细胞培养物的上清液并从中纯化蛋白。

9.权利要求8所述的方法，其中所述昆虫细胞包括Sf9昆虫细胞、Sf21昆虫细胞或High 5昆虫细胞。

10.权利要求8或9所述的方法，其中步骤(3)中的转染采用脂质体法。