[发明专利]检测兽药残留物的标记型电化学免疫传感器的制备及应用

说明书

技术领域

本发明涉及兽药残留物检测技术领域，更具体地说是一种检测兽药残留物的标记型电化学免疫传感器的制备，本发明还涉及采用所述的电化学免疫传感器检测食品中兽药残留的方法。

背景技术

兽药残留(residues ofveterinary drug)是指对食品动物用药后，在动物体内经过生物转运(即吸收、分布、排出)和生物转化，蓄积或存留于畜禽机体或产品(如鸡蛋、奶品、肉品等)中原型药物或其代谢产物，包括与兽药有关的杂质的残留。

目前，兽药残留可分为7类：抗生素类、驱肠虫药类、生长促进剂类、抗原虫药类、灭锥虫药类、镇静剂类、β-肾上腺素能受体阻断剂。

兽药在防治动物疾病、提高生产效率、改善畜产品质量等方面起着十分重要的作用。然而，由于养殖人员对科学知识的缺乏以及一味地追求经济利益，致使滥用兽药现象在当前畜牧业中普遍存在。滥用兽药极易造成动物源食品中有害物质的残留，兽药残留严重威胁着人们的身体健康和生命安全，同时严重影响我国动物性食品的出口贸易，成为当前亟待解决的问题。

随着人民生活水平的不断提高，肉、禽、蛋、乳等动物性食品在我国人民的膳食结构中所占的比重越来越大。食品安全问题越来越为广大消费者所关注，动物性食品中的兽药残留问题已成为人们普遍关注的一个社会热点问题。除了严格控制兽药残留的监督管理，还必须不断研究新的检测方法。

建立一种高灵敏度和特异性的快速检测兽药残留物的方法，便成为当前该研究领域亟需解决的问题之一。目前已有的兽药残留物检测方法主要包括HPLC或LC-MS联用技术、高效液相色谱法(HPLC)、毛细管电泳(CE)、薄层色谱法、免疫化学分析法。

1.借助于HPLC或LC-MS联用技术等大型精密仪器建立起来的兽药残留物仪器检测方法，对兽药残留物的检测虽说具有很高的灵敏度，但是该方法不能一次就鉴定出分析物的结构，往往还需要用GC-MS确认结构，技术成本较高，传统方法所需的时间一般都较长，有的甚至长达几个小时，操作复杂，且重现性差不能用于现场的快速检测。

2.高效液相色谱法(HPLC)检测兽药残留是目前国内绝大多数检测机构都在使用的方法，虽然灵敏度高，但具有样品的前处理相对复杂、检测周期长、程序复杂、所需试剂繁多等缺点。

3.毛细管电泳(CE)所需样品量极少，一般只需几纳克，灵敏度主要通过更灵敏的检测器或样品预浓缩技术来解决。紫外检测器能检测到几个问，但因样品用量只有几个nL的体积，故所用浓度被限制在10^-6级，因此在使用UV检测器测定兽药残留时样品一般要经过浓缩才能达到要求。

4.薄层色谱分析法能够检测动物组织中的青霉素类残留物，但其缺点是复杂，操作费用高，时间长，而且灵敏度低。

5.免疫亲和柱由于检测费用过高而无法普及，应用ELISA法时，由于样品的复杂多样，使得分析人员在实际检测样品中易出现假阳性或假阴性结果。

这些已越来越不适用现代检测分析的要求。免疫传感器具有无放射性污染、检测设备相对简单、操作方便、灵敏度高、分析速度快、选择性强、体系容易集成化、微型化等优点。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供了一种样品处理简单、检测速度快、灵敏度高、特异性强的检测兽药残留物的标记型电化学免疫传感器的制备及检测方法。

为了解决上述技术问题，本发明是通过以下措施来实现的：一种检测兽药残留物的标记型电化学免疫传感器的制备方法，其特征是包括以下步骤：

(1)选择能与兽药残留物识别的抗体；

(2)制备石墨烯；

(3)制备酶标抗体；

(4)利用组装表面修饰技术等，将单层石墨烯、电活性物质及酶标抗体修饰到电极表面，制作标记型电化学免疫传感器。

本发明所述将石墨烯、电活性物质及酶标抗体修饰到电极表面包括以下步骤：

(1)将所用电极进行预处理，用0.05μm的氧化铝粉仔细地打磨，依次在无水乙醇和水中超声清洗，再分别用无水乙醇、丙酮、纯水清洗，氮气干燥；

(2)将制备的石墨烯超声分散处理，得到分散的石墨烯溶液；

(3)将分散的石墨烯溶液滴涂到步骤(1)处理的电极表面，晾干；

(4)将步骤(3)石墨烯修饰的电极浸泡在含有电活性物质和酶标抗体溶液中4-8h，温度4℃，洗净，取出晾干；

(5)将步骤(4)电极浸泡在含有待测抗原的样品溶液中10-20min，温度37℃，洗涤；

(6)将修饰后的电极结合电化学工作站进行测定。