[发明专利]新型miRNA在肿瘤诊断和预后判断中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术和医学领域，具体地说，本发明涉及一种RNA小分子——miR-199a/b-3p在肿瘤诊断、治疗方法选择和预后判断中的应用及其应用方法。

背景技术

微小RNA(micro RNA，简称miRNA)是一类短序列、非编码、具有调控功能的单链小分子RNA，长约18～24nt。

关于miRNA的最早报道是1993年Lee等报道的在秀丽线虫(C.elegants)体内发现的一种呈时间特异性表达的小分子RNA，即可调节线虫发育的lin-4【Lee，R.C.等，The C.elegans heterochronic gene lin-4 encodes small RNAs withantisense complementarity to lin-14(线虫异时性基因lin-4编码与lin-14反义互补的小RNA).Cell.1993，75：843-854】。2000年，Reinhart等【Reinhart，B.J.等，The21-nucleotide let-7 RNA regulates developmental timing in Caenorhabditis elegans(20核苷酸的let-7RNA调控新杆状线虫中的发育周期).Nature.2000，403：901-906】又发现不同时期表达的let-7。到目前，公用miRNA数据库中已收录了数百种人类miRNA序列，其中三分之二已被实验证实。

微小RNA来源于长度约为1000bp的长链RNA初始转录产物(Pri-miRNA)，Pri-miRNA分子在细胞核中经Drosha酶剪切形成长度约60～80nt的具有茎环结构的miRNA前体(Pre-miRNA)。miRNA前体转运至胞质后，被进一步加工成miRNA。

微小RNA在动植物细胞中通过对目标mRNA的切割和转录抑制发挥重要作用，参与细胞生长、组织分化和肿瘤形成等多种过程。miRNA在物种间具有高度的保守性、时续性和组织特异性。目前认为miRNA在细胞凋亡、增殖、分化、血管生成及肿瘤形成等方面均具有重要的调节作用，参与人体大约30％的基因调节，与肿瘤、心血管疾病、肝病、免疫紊乱及代谢紊乱等多种发病有关。

在上述疾病中，miRNA与肿瘤的关系是很多研究的重点。已经发现若干miRNA通过负调控基因的表达与慢性淋巴细胞性白血病、肺癌、乳腺癌、结肠癌高度相关。miRNA的正调控靶基因现象是最近的发现，具体机制还不明确。

有学者提出了“癌微小RNA”(OncomiRs)”的观点【Esquela-Kerscher，A.等，OncomiRs-microRNAs with a role in cancer(癌微小RNA-在癌症中发挥作用的微小RNA).Nat Rev Cancer.2006，6：259-269；Hammond，SM.等，MicroRNAs as oncogenes(作为癌基因的微小RNA).Curr Opin Genet.2006，16：4-9】，即认为某些miRNA的异常表达在肿瘤的发生发展过程中充当了类似癌基因的角色。

研究发现MicroRNA主要通过促进靶mRNA的降解或抑制其翻译过程而发挥调控作用，广泛参与细胞增殖、凋亡、代谢及分化等过程。MicroRNA的异常表达与肿瘤的发生、发展及演进有着极为密切的关系。基因组不稳定性是恶性肿瘤的基本特征，在癌发生发展过程中经常伴随染色体的扩增或缺失，从而导致癌基因的激活或抑癌基因的失活。许多microRNA分子定位于癌染色体变异区内，可作为癌基因或抑癌基因而在癌变过程中发挥重要作用。近年来，miRNA以其分子量小、实验操控性强以及功能特异性等特点，使研究者们对其与肿瘤诊断、治疗和预后领域的兴趣越来越浓厚。

目前发现，microRNA的表达情况可鉴别肺癌和肺组织，也可以用于预测肺癌患者的预后。

let-7 miRNA在肺癌组织内低表达，肿瘤组织内相对低表达的患者接受根治性手术后的预后比高表达let-7的患者差，可以作为一个独立的预后因素【Takamizawa，J.等，Reduced expression of the let-7microRNAs in human lung cancers in association with shortened postoperative survival(具有缩短的术后生存期的人肺癌中的let-7微小RNA表达下降).Cancer Res.2004；64：3753-3756】。在其它肿瘤亦有许多类似的发现。