[发明专利]一种无标签结核融合蛋白ESAT6-Ag85B

权利要求书

1.一种无标签结核融合蛋白ESAT6-Ag85B，其特征在于由以下步骤制备而成： 

（1）将结核分枝杆菌的基因ESAT6和Ag85B进行重组融合，构建重组质粒；

（2）将上述步骤（1）中制备的质粒进行转化，挑选阳性克隆进行诱导表达，获得重组基因的表达物；

（3）对上述步骤（2）中的重组基因表达物进行纯化。

2.根据权利要求1所述的一种无标签结核融合蛋白ESAT6-Ag85B，其特征在于所述的步骤（1）的重组质粒的构建方法为：根据GenBank中H37Rv中的ESAT6和Ag85B的基因序列，应用分子克隆技术设计含有不同酶切位点的ESAT6引物和Ag85B引物，以H37Rv-DNA为模板PCR扩增出相应大小的基因片段，通过双酶切和T4连接酶的作用将扩增的基因片段连接，将连接产物转化入大肠杆菌克隆载体。

3.根据权利要求2所述的一种无标签结核融合蛋白ESAT6-Ag85B，其特征在于所述的连接产物转化入大肠杆菌克隆载体后，挑选阳性克隆进行PCR验证并测序，测序正确的重组质粒再次转化入大肠杆菌表达载体。

4.根据权利要求1所述的一种无标签结核融合蛋白ESAT6-Ag85B，其特征在于所述的步骤（2）的诱导表达方法为：将步骤（1）中获得的含有重组质粒的菌种接入含有卡那霉素的LB液体培养基中，35～40℃振荡培养10～14小时；再将1ml的该菌液移入100ml的LB液体培养基中，35～40℃振荡培养2～4小时，至吸光度A600 值为0.6～0.8，诱导振荡培养6～8h后，离心，收集菌体。

5.根据权利要求1所述的一种无标签结核融合蛋白ESAT6-Ag85B，其特征在于所述的步骤（3）采用离子交换层析和疏水层析的两种色谱分析方法进行最终的蛋白纯化。

6.根据权利要求1所述的一种无标签结核融合蛋白ESAT6-Ag85B，其特征在于作为用于制备结核病疫苗的抗原。