[发明专利]使体细胞重编程以形成诱导全能干细胞的组合物,和用其形成诱导全能干细胞的方法

权利要求书

1.一种用于对体细胞进行重编程从而形成胚胎干细胞样细胞的组合物，所述组合物包含：

a)Bmi1(B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1)蛋白或编码Bmi1的核酸分子；和

b)Oct4蛋白或编码Oct4的核酸分子。

2.如权利要求1所述的组合物，其中通过携带有编码Bmi1蛋白的核酸分子的表达载体表达Bmi1蛋白，和通过携带有编码Oct4蛋白的核酸分子的表达载体表达Oct4蛋白。

3.如权利要求1所述的组合物，其中通过锚定有编码Bmi1蛋白的核酸分子的病毒表达Bmi1蛋白，通过锚定有编码Oct4蛋白的核酸分子的病毒表达Oct4蛋白。

4.一种通过把Bmi1(B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1)基因和Oct4基因引入到体细胞中使所述体细胞重编程产生胚胎干细胞样细胞的方法。

5.如权利要求4所述的方法，所述方法包括：

(i)在培养基中培养成纤维细胞；

(ii)将各自携带Bmi1基因和Oct4基因的载体转染入包装细胞，用所述包装细胞感染所述成纤维细胞；和

(iii)在用于培养胚胎干细胞的条件下培养所感染的成纤维细胞。

6.如权利要求5所述的方法，其中通过将编码Bmi1蛋白的核酸分子插入到pBabe puro载体中从而构建携带有Bmi1基因的载体，并通过将编码Oct4蛋白的核酸分子插入到pBabe neo载体中从而构建携带有Oct4基因的载体。

7.如权利要求5所述的方法，其中所述包装细胞是PT67包装细胞。

8.一种胚胎干细胞样细胞，所述胚胎干细胞样细胞按照权利要求4至7中任一项所述的方法制备。

9.如权利要求8所述的胚胎干细胞样细胞，所述胚胎干细胞样细胞表现出对碱性磷酸酶和抗SSEA-1、Oct-4和Sox2的抗体的阳性反应。

10.一种用于对体细胞重编程以形成神经干细胞的方法，所述方法包括：

将Bmi1(B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1)基因导入所述体细胞；和

在用于培养神经干细胞的条件下培养所述体细胞。

11.用于对体细胞重编程以形成胚胎干细胞样细胞的组合物，所述组合物包含：

a)选自由Shh(Sonic Hedeghog信号)蛋白、编码Shh蛋白的核酸分子、氧甾醇、嘌吗啡胺及其组合组成的组的重编程因子；和

b)Oct4蛋白或编码Oct4蛋白的核酸。

12.如权利要求11所述的组合物，其中通过携带有编码Shh蛋白的核酸分子的表达载体表达Shh蛋白，和通过携带有编码Oct4蛋白的核酸分子的表达载体表达Oct4蛋白。

13.如权利要求11所述的组合物，其中所述重编程因子选自由Shh蛋白、氧甾醇、嘌吗啡胺及其组合组成的组，且所述Oct4蛋白通过锚定有编码Oct4蛋白的核酸分子的病毒表达。

14.一种用于将体细胞重编程以形成胚胎干细胞样细胞的方法，所述方法包括：

用选自由Shh(Sonic Hedeghog)、Shh编码核苷酸分子、氧甾醇、嘌吗啡胺及其组合组成的组的重编程因子处理所述体细胞；和

将Oct4基因导入所述体细胞。

15.如权利要求14所述的方法，所述方法包括：

(i)在培养基中培养成纤维细胞；

(ii)用转染有携带Oct4基因的载体的包装细胞感染所述成纤维细胞，同时用选自由Shh蛋白、Shh蛋白编码核酸、氧甾醇、嘌吗啡胺及其组合组成的组的重编程因子处理所述成纤维细胞；和

(iii)在用于培养胚胎干细胞的条件下培养所感染的成纤维细胞。

16.如权利要求15所述的方法，其中在用于培养神经干细胞的条件下，通过将所述Oct4基因转导入所述成纤维细胞，并同时用选自由Shh蛋白、氧甾醇和嘌吗啡胺组成的组的重编程因子处理所述成纤维细胞从而进行步骤(ii)。

17.一种胚胎干细胞样细胞，所述胚胎干细胞样细胞按照权利要求14至16中任一项所述的方法制备。