[发明专利]一种新的制备肝实质细胞的方法

权利要求书

1.一种肝实质细胞的分化诱导方法，其特征在于，所述方法包括：在细胞中过表达以下转录因子或其突变体：

Gata4；

选自Hnf1α、Hnf4α或Hnf6的一个或多个；和

选自Foxa1、Foxa2或Foxa3的一个或多个。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，还在细胞中过表达选自以下的一种或多种转录因子或其突变体：

Hlf、Hhex、Jarid2、Coup-TF1、Lrh1、Fxr或Pxr。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，过表达转录因子或其突变体的细胞来源于体细胞或胚胎细胞。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，过表达转录因子或其突变体的细胞是：成纤维细胞，上皮细胞，血液细胞，神经细胞，胚胎细胞，组织或器官来源的细胞。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的细胞是衰老或凋亡途径被抑制的细胞。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的细胞低表达或不表达p19Arf。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的肝实质细胞具有如下一种或多种性能：

1)形成上皮样细胞克隆；

2)表达选自以下的一种或多种基因或蛋白：Albumin，Ttr，Aat；

3)表达选自以下的一种或多种基因或蛋白：CK8和CK18；

4)表达选自以下的一种或多种基因或蛋白：E-cadherin、Gjp1和Cldn2；

5)表达选自以下的一种或多种基因或蛋白：tdo2，transferrin，pah，fxr，vitronectin；

6)积累肝糖原；

7)转运乙酰化低密度脂蛋白；

8)表达选自以下的一种或多种基因或蛋白：糖代谢、药物代谢、脂肪酸代谢、胆固醇代谢、胆汁酸代谢相关基因或蛋白、调控止血和纤维蛋白溶解的基因或蛋白、第I级和第II级异源物代谢基因、分泌性蛋白基因。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在细胞中过表达所述的转录因子或其突变体的方法是：

(a)提供用于过表达转录因子或其突变体的细胞；

(b)用表达载体将所述的转录因子或其突变体转入(a)的细胞中；

(c)培养(b)获得的细胞，富集获得转入了所述的转录因子或其突变体的细胞，该细胞就是肝实质细胞。

9.一种肝实质细胞，其特征在于，所述肝实质细胞由权利要求1-8任一所述的方法分化诱导产生。

10.权利要求9所述的肝实质细胞的用途，用于制备促进肝脏再生或治疗肝损伤的组合物。

11.权利要求10所述的肝实质细胞的用途，用于作为体外模型，进行肝脏相关疾病或药物的研究。

12.如权利要求11所述的用途，其特征在于，所述的肝脏相关疾病或药物的研究包括：

研究药物运输、药物代谢、肝形成、肝再生；或

肝毒性测试、筛选肝细胞毒性化合物、筛选调节肝细胞功能化合物。

13.权利要求9所述的肝实质细胞的用途，用于产生Albumin蛋白。

14.一种组合物，其特征在于，所述组合物含有：

有效量的权利要求9所述的肝实质细胞；以及

药学上可接受的载体。

15.一种转录因子组合；包括以下转录因子或其突变体：

Gata4；

选自Hnf1α、Hnf4α或Hnf6的一个或多个；和

选自Foxa1、Foxa2或Foxa3的一个或多个。

16.如权利要求15所述的转录因子组合，其特征在于，还包括选自以下的一种或多种转录因子或其突变体：

Hlf、Hhex、Jarid2、Coup-TF1、Lrh1、Fxr或Pxr。

17.权利要求15或16所述的转录因子组合的用途，用于制备肝实质细胞。