[发明专利]一种长春花高含量抗癌生物碱制备方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种长春花高含量抗癌生物碱制备方法，长春花为夹竹桃科药用植物，天然植物体中含有100余种生物碱，其中抗癌有效成份长春碱和长春新碱的含量甚微，仅在十万分之几至百万分之几，由于长春碱、长春新碱是治疗白血病、淋巴肉瘤、绒毛膜上皮癌等肿瘤的有效药物，所以价值十分昂贵。应用毛状根转化技术诱导出长春花毛状根，筛选并建立生长迅速、抗癌生物碱含量高而稳定的毛状根克隆繁殖系统，将为长春花抗癌生物碱的工业化生产和产业化开发开辟一条有效的途径。

【背景技术】

植物次生代谢产物具有复杂的化学结构，至今仍没有找到有效的或经济的合成方法。因此人们对如何产生出更多的次生代谢产物，往往采用愈伤组织培养和细胞悬浮培养。但是，在未分化的细胞中，生长通常与次生代谢通路是不相容的，因为在整体植株上，次生代谢产物一般只积累在特殊的组织或器官中，所以未分化的细胞和愈伤组织不能产生或很少产生次生代谢产物是很自然的。

【发明内容】

发根农杆菌(Agrobaterium rhizogenes)可以感染高等植物，从而使被感染的植物产生毛状根。毛状根的产生，涉及到发根农杆菌基因组中Ri质粒进入到植物基因组中所形成的一个稳定的特征，在生理上，根系统所具有的代谢通路能够较完整地表达，其次生代谢产物和含量不低于或大大高于根系统所产生的次生代谢产物，并且某些无性系在离体培养的条件下还表现出快速生长的特征，通过对所获得的大量转化毛状根无性系的选择，可以获得快速生长和次生代谢产物含量高的无性系。目前，这种优良无性系可以用发酵器进行大规模的工业化培养，从而获得那些从天然植物中难以大量获得的次生代谢产物，使人类摆脱对天然植物的依赖。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：应用毛状根转化技术诱导出长春花毛状根，筛选并建立生长迅速、抗癌生物碱含量高而稳定的毛状根克隆繁殖系统，获得毛状根克隆繁殖的工艺指标和工艺流程，为长春花抗癌生物碱的产业化生产开辟一条有效的途径。

【具体实施方式】

将发根农杆菌活化

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用活化的发根农杆菌感染长春花无菌外植体

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将感染部位长出的毛状根逐一分离

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将各毛状根无性系离体培养

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测定生长速率、生物碱含量与成分分析并与原植物比较

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获得高含量抗癌生物碱的毛状根优良无性系

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建立优良无性系培养系统(发酵器)

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提取、分离、纯化生物碱