[发明专利]黄芩查尔酮合酶基因的启动子及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及植物基因工程技术，提供了用于控制植物中重组基因表达的DNA序列和构建体，即本发明提供了黄芩查尔酮合酶基因(CHS)的启动子序列。

背景技术

植物基因工程技术需要使用调控序列用于调节转基因的表达，调控序列包含启动子、强化子等，这些序列调控了基因的表达，进而影响蛋白质的生产。

启动子在遗传学中是指一段能使基因进行转录的DNA序列。启动子可以被RNA聚合酶辨认，并开始转录。RNA聚合酶在进行转录时常需要一些辅助因子参与作用，称为转录因子。转录因子对植物次生代谢的调节是通过与合成基因启动子上相应的顺式作用元件结合而实现的，合成基因启动子中均含有转录因子能够识别的顺式作用元件。启动子与转录因子结合位点是影响真核基因表达的重要调控元件，这种结合往往受到外界环境的影响。尽管真核基因的表达在多层次受不同的因子协同调控，但调控的主要环节在基因的转录水平。

黄芩CHS的cDNA序列是已知的(GeneBank的登记号为AB008748)，但是黄芩CHS启动子序列没有公开。

序列的简要描述

SEQ ID No.1是黄芩的一段DNA序列，包括CHS启动子。

SEQ ID No.2是黄芩的一段DNA序列，包括CHS启动子。

SEQ ID No.3是黄芩的一段DNA序列，包括CHS启动子

发明内容

本发明一方面提供了与CHS启动子相应的或来源于CHS启动子的DNA分子。

本发明另一方面提供了DNA构建体，该构建体包含从5′到3’方向操作性地连接的：1)黄芩CHS启动子；2)目的基因；3)3’UTR。在优选的实施方式中，CHS启动子包含SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3序列。

编码对SEQ ID No.1经添加、取代、插入或缺失一个或多个碱基且具有SEQ ID No.1功能的DNA序列。

本发明另一方面是提供一种转化植物，该转化植物至少含有一个本发明DNA构建体的植物细胞。

本发明涵盖了所有提供功能性植物启动子的任何CHS启动子缺失型突变体，这种启动子都属于“SbCHS启动子”。

附图说明

图1植物表达载体pSB物理图谱。

图2T0代转基因烟草的PCR分析。M，lib DNA Ladder；1-10，转基因烟草；11，非转基因烟草为负对照；12，质粒p1301为正对照。

图3转基因烟草GUS活性分析。

具体实施方式

实施例1SbCHS启动子的克隆

根据已知的黄芩CHS cDNA序列(GeneBank：AB008748)，设计引物PC4：5′-CGCCGTGAAGTTGTCGTTCTCCT-3′，PC5：5′-CATTGTCGCCGGAGAAGGAGGTA-3′，PC6：5′-CTCCTCCATTCCATTCCATTCCATACA-3′，由上海生工生物技术公司合成。以黄芩总DNA为模板，按照Genomewalking试剂盒(Takara公司)说明书进行PCR扩增获得长度为490bp的CHS基因的启动子片段，1％琼脂糖凝胶电泳，回收纯化后连接到pGEM-T载体上，筛选鉴定后进行测定，序列如序列表中SEQ ID No.1所示。

利用Softbarry软件对SEQ ID No.1进行生物信息学分析，结果预测该序列是一个植物启动子，在该序列上发现3个调控元件，分别为CT-LB、GA-5、ERE 2。

实施例2植物表达载体的构建

根据SEQ ID No.1序列设计引物，且在5′端加上PstI酶切位点，3′端加上BglII酶切位点，由上海生工生物技术公司合成引物，序列如下：C1：5′-CTGCAGCGTCGAGTGATATGAAAAAAGAAGA-3′，C2：5′-AGATCTTGTCGCCGGAGAAGGAGGTAATTGG-3′。以黄芩总DNA为模板，按常规方法进行PCR扩增获得502bp的目的片段，电泳回收纯化，连接到pGEM-T载体上，筛选鉴定后获得SbCHS-T。