[发明专利]抗重金属铜的单克隆抗体及其制备方法

权利要求书

1.杂交瘤细胞株C9D11，其保藏编号为CCTCC NO：C201087。

2.由杂交瘤细胞株C9D11CCTCC NO：C201087分泌得到的单克隆抗体。

3.一种抗原，按照包括如下步骤的方法制备得到：

1)将可溶性铜盐溶液与螯合剂溶液混合，进行络合反应，得到铜离子与螯合剂的络合物；

2)在步骤1)的基础上，再加入载体蛋白溶液和偶联缓冲液，进行偶联反应，得到载体蛋白与所述络合物的偶联物，即为完全抗原。

4.根据权利要求3所述的抗原，其特征在于：

所述步骤1)中，所述可溶性铜盐与所述螯合剂的投料比满足如下条件：所述可溶性铜盐中的Cu²⁺与所述螯合剂的物质的量比为1∶1；

所述步骤2)中，所述螯合剂与所述载体蛋白的投料比满足如下条件：所述螯合剂与所述载体蛋白中的赖氨酸的物质的量的比为5∶1。

5.根据权利要求3或4所述的抗原，其特征在于：

所述步骤1)中，所述络合反应在pH值为7.4的条件下进行；

所述步骤2)中，所述偶联反应在pH值为9.0的条件下进行。

6.根据权利要求3-5中任一所述的抗原，其特征在于：

所述步骤1)中，所述络合反应的温度为25℃，所述络合反应的时间为10分钟；

所述步骤2)中，所述偶联反应的温度为25℃，所述偶联反应的时间为12小时。

7.根据权利要求3-6中任一所述的抗原，其特征在于：

所述步骤1)中，所述螯合剂的分子式为C₂₂H₂₈N₄O₁₀S·3HCl；

所述步骤1)中，所述可溶性铜盐溶液按照包括如下步骤的方法制备得到：将铜片溶于浓度为68％(体积百分含量)的HNO₃水溶液中，待铜片完全反应后，得到所述可溶性铜盐溶液；

所述步骤1)中，所述螯合剂溶液按照包括如下步骤的方法制备得到：将所述螯合剂加入pH值为9.73、浓度为1.4165g/50mL的HEPES缓冲液中，得到所述螯合剂溶液；

所述步骤2)中，载体蛋白BSA溶液按照包括如下步骤的方法制备得到：将所述载体蛋白BSA溶于pH值为7.4、浓度为1.4165g/50mL的HEPES缓冲液，得到所述载体蛋白溶液；

所述步骤2)中，所述载体蛋白为牛血清白蛋白或匙孔血蓝蛋白；

所述步骤2)中，所述偶联缓冲液为pH9.73、浓度为1.4165g/50mL的HEPES缓冲液。

8.一种不完全包被原，按照包括如下步骤的方法制备得到：将螯合剂、载体蛋白和反应缓冲液混合，在pH至9.0、25℃的条件下反应12小时，得到螯合剂与载体蛋白的不完全包被原。

9.根据权利要求8所述的不完全包被原，其特征在于：所述螯合剂与所述载体蛋白的投料比满足如下条件：所述螯合剂与所述载体蛋白中的赖氨酸的物质的量的比为5∶1。

和/或，所述反应在pH值为9.0的条件下进行。

和/或，所述反应的温度为25℃，所述反应的时间为12小时；

和/或，所述螯合剂溶液按照包括如下步骤的方法制备得到：将螯合剂加入pH值为9.73、浓度为1.4165g/50mL的HEPES缓冲液中，再调节pH值至9.0，得到所述螯合剂溶液；

和/或，所述螯合剂的分子式为C₂₂H₂₈N₄O₁₀S·3HCl；

和/或，所述载体蛋白为牛血清白蛋白。

10.权利要求2所述单克隆抗体在检测样品中是否含有铜中的应用；权利要求2所述单克隆抗体在检测样品中铜的含量中的应用。