[发明专利]表达轮状病毒类表达颗粒的毕赤酵母、其制备方法及用途

权利要求书

1.一种人轮状病毒结构蛋白表达盒，其特征在于，包括以下元件：

(a)起始信号元件AOX；

(b)轮状病毒结构蛋白基因；

(c)终止信号元件TT。

2.如权利要求1所述的人轮状病毒结构蛋白表达盒，其特征在于，所述轮状病毒VP2由SEQ ID NO：1编码；所述轮状病毒VP4由SEQID NO：5编码；所述轮状病毒VP6由SEQ ID NO：2编码；或所述轮状病毒VP7由SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4编码。

3.一种用权利要求1所述的表达盒转染的酵母细胞，其特征在于，所述酵母细胞的染色体内整合有权利要求1的表达盒，所述表达盒表达轮状病毒VP2、VP4、VP6和VP7结构蛋白，所述酵母细胞在甲醇诱导下表达轮状病毒结构蛋白，且所述的轮状病毒结构蛋白在所述酵母中自行装配成类病毒颗粒。

4.如权利要求3所述的酵母细胞，其特征在于，所述酵母细胞选自：毕赤酵母、酿酒酵母或汉逊酵母。

5.如权利要求4所述的酵母细胞，其特征在于，所述酵母细胞选自毕赤酵母GS115菌株和KM71菌株。

6.如权利要求3-5任一所述的酵母细胞，其特征在于，所述表达盒插入pPIC3.5K质粒。

7.一种制备轮状病毒类病毒颗粒的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：

(i)在适合表达的条件下，培养权利要求3所述的酵母细胞，从而表达轮状病毒结构蛋白VP2、VP4、VP6和VP7；和

(ii)从培养物中分离出类病毒颗粒。

8.一种用权利要求7所述的方法制备的类病毒颗粒，其特征在于，所述类病毒颗粒由轮状病毒VP2、VP4、VP6和VP7蛋白组成。

9.如权利要求8所述的类病毒颗粒的用途，其特征在于，用于制备预防或治疗轮状病毒感染的疫苗组合物。

10.权利要求3所述的酵母细胞的制备方法，其特征在于，所述方法包括步骤：

a)用权利要求1所述的表达盒插入到pPIC3.5K质粒中，使质粒同时含有轮状病毒VP2、VP4、VP6和VP7结构基因的表达盒；

b)用所述表达轮状病毒VP2、VP4、VP6和VP7的质粒一起转化酵母细胞，整合入酵母染色体中，从而获得权利要求3所述的生产轮状病毒类病毒颗粒的酵母细胞。