[发明专利]19-S-甲基格尔德霉素和4，5-双氢-19-S-甲基格尔德霉素及其制备方法

权利要求书

1.组格尔德霉素生物合成苯醌环修饰的衍生物，其特征是，所述衍生物包含19-S-甲基格尔德霉素(化合物1)和4，5-双氢-19-S-甲基格尔德霉素(化合物

2)，化学结构如下所示：

2.制备权利要求1所述衍生物的方法，其特征是，化合物1由吸水链霉菌17997菌株直接发酵；化合物2由吸水链霉菌17997P450细胞色素单氧化酶gdmP基因阻断变株发酵产生。

3.权利要求2所述的制备方法，其特征是，产生化合物2所用变株的构建是，根据gdmP基因序列(GenBank DQ914285)设计引物，以吸水链霉菌17997基因组为模板，进行PCR，分别获得与gdmP基因同源的两个片段，在其中间以相应的酶切位点插入选择性标记基因，并通过构建大肠杆菌/链霉菌穿梭质粒获得用于gdmP基因阻断的重组载体；将重组载体导入吸水链霉菌17997中，根据选择性标记筛选转化子；利用PCR方法鉴定确认，gdmP基因序列中插入了选择性标记基因，从而获得吸水链霉菌17997的gdmP基因阻断变株。

4.权利要求2所述的制备方法，其特征是，将新鲜培养的吸水链霉菌17997或其gdmP基因阻断变株斜面或平板，挖块接种于液体种子培养基，培养24-48h；5％转种量接种于液体发酵培养基，28℃继续振荡培养，至120-144h，获得吸水链霉菌17997或其gdmP基因阻断变株的发酵培养液。

5.权利要求2所述的制备方法，其特征是，吸水链霉菌17997或gdmP基因阻断变株的发酵培养上清液，用等体积乙酸乙酯提取，旋转蒸发浓缩后上硅胶柱层析，以9∶1体积比的二氯甲烷-甲醇混和液进行洗脱，或者以起始体积比为50∶50石油醚-乙酸乙酯混和液进行梯度洗脱，以5％为一个梯度逐步提高乙酸乙酯比例，至石油醚∶乙酸乙酯为35∶65时得到目的洗脱液，分部收集洗脱液，经TLC硅胶板检测后，合并含有化合物1或化合物2的分部收集红色洗脱液，旋转蒸发浓缩后复溶于甲醇中，经Sephadex LH-20柱层析分离，分部收集洗脱液，合并含有化合物1或化合物2的分部收集红色洗脱液，旋转蒸发浓缩后，进行反相HPLC，根据HPLC出峰的保留时间，合并含有化合物1或化合物2的洗脱液，旋转蒸发浓缩，分别得到红色的化合物1或化合物2纯品。

6.权利要求1所述衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。

7.权利要求1所述衍生物的药物组合物，是以所述衍生物为有效成分，与药学上可接受的一种或多种载体所组成。

8.权利要求7所述的组合物，是指适合药用的任何制剂形式。

9.权利要求7或8所述组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。