[发明专利]一种高效分离制备23-乙酰泽泻醇B的方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药活性单体的制备方法，具体涉及23-乙酰泽泻醇B的分离制备方法。

背景技术

23-乙酰泽泻醇B是中药泽泻中主要活性成分，2010年版中国药典将该成分作为中药泽泻及其饮片的质控指标，所以该物质的单体的市场需求量将大增。传统的获取该物质单体的方法是先用大量乙醇提取，再用柱色谱洗脱后，经结晶与重结晶得到的。该方法操作复杂、步骤繁琐、耗费大量的有机溶剂、花费大量的人力物力，得到的纯度较低，无法满足绿色工业化的要求。专利0312466.6公开了采用超临界CO₂流体萃取总甾醇提取物的工艺，但得到的终产物为总甾醇，不是单体，且所得萃取物中23-乙酰泽泻醇B的含量较低。本专利通过优化萃取参数，萃取得到了23-乙酰泽泻醇B含量较高的提取物，结合逆流色谱分离纯化技术及结晶方法，获得了高纯度的23-乙酰泽泻醇B单体。

发明内容

本发明的目的是提供一种高效分离制备23-乙酰泽泻醇B的方法，可以用于从泽泻中提取分离制备23-乙酰泽泻醇B单体。为实现上述目的，本发明采取如下方案：以超临界CO₂流体萃取泽泻中的总甾醇提取物，然后采用高速逆流色谱对提取物进行进一步分离和纯化；最后采用重结晶的方法进行精制，得到高纯度的23-乙酰泽泻醇B。更具体地说，本发明采取以下方案：

A.粉碎：将已干燥的泽泻药材粉碎成粗粉备用；

B.提取：将泽泻粗粉装入萃取罐中进行超临界CO₂流体萃取，萃取温度35～45℃，萃取压力30～40MPa，萃取时间1～3小时，萃取次数1～3次，萃取结束后收集的萃取物为泽泻的总甾醇提取物；

C.分离：将萃取物用高速逆流色谱进行分离纯化，根据紫外检测器谱峰，收集目标组分；

D.精制：将收集到的目标组分用重结晶的方法进行精制，即可得到高纯度的23-乙酰泽泻醇B单体。

在步骤B超临界CO₂流体萃取温度为萃取温度40℃，萃取压力为35MPa，萃取时间为2小时，萃取次数为1次。

在步骤C中采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水组成的溶剂体系进行高速逆流色谱分离。

在步骤D中采用丙酮-水或甲醇-水进行重结晶。

本发明的突出进步和显著效果在于，该方法步骤简单，效率高，易于重复，适用于工业化生产，分离制备的23-乙酰泽泻醇B纯度可达99％以上。

具体实施方式

实施例1泽泻超临界CO2流体萃取溶液的制备

称取泽泻粗粉3194.8g，粒度：20目，装入10L的萃取罐中。萃取路线为：CO2钢瓶→冷却系统→高压泵→萃取釜→解析釜I→解析釜II→CO₂储罐→循环。萃取温度40℃，萃取压力35MPa，2h，至仪器达到设定条件时开始计时，循环萃取2h。萃取结束后，从解析釜I、解析釜II中放出萃取物，共计127.5g，采用超临界CO2流体萃取方法制备的泽泻提取物的得率为：3.99％。

实施例2泽泻中23-乙酰泽泻醇B逆流色谱分离

所用溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水＝3∶2∶3∶2，四种溶剂按比例配置于分液漏斗中，充分振荡15min(剧烈)，后静置30min分相，待平衡后分别得到上下两相，上相作固定相，下相作流动相，超声脱气30min，备用。称取适量样品充分溶解于下相(流动相)中，使样品浓度为20mg/mL，进样量1ml，将固定相与流动相按体积比70∶30，以流速20mL/min泵入高速逆流色谱主机螺旋管，保护压力设定为1MPa。当主机螺旋管被完全充满后，调节恒温水浴为25℃，开启HSCCC主机，旋转方向为顺时针，使转速逐渐增加到800rpm，将流动相以2.0mL/min流速泵入。待HSCCC主机螺旋管内流动相与固定相达到动力学平衡时，即只有流动相流出时，进样。紫外检测器设置波长为254nm。根据紫外吸收色谱图手动收集各组分，按时间进行标记。

实施例3含23-乙酰泽泻醇B组分的结晶及重结晶

将收集到的23-乙酰泽泻醇B组分溶液浓缩后，经液相色谱分析，该溶液主要成分为23-乙酰泽泻醇B，将该溶液室温放置一段时间，即析出无色针状结晶，离心后分离结晶，用丙酮-水或甲醇-水进行重结晶，真空干燥后即可获得2mg高纯度的23-乙酰泽泻醇B单体，经液相色谱分析，纯度达99％以上，逆流色谱纯化精制干燥后23-乙酰泽泻醇B的得率为：10％，则采用超临界流体萃取、逆流色谱分离纯化，浓缩结晶真空干燥工艺，23-乙酰泽泻醇B得率为0.40％。

实施例4结构确证

将所得晶体进行熔点测定，紫外光谱、红外光谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱分析，结果显示，本品为无色针晶，mp：183℃；紫外最大吸收波长为：196nm，EI-MS，m/z：514，IR v maxcm-13474(OH)，1744(COO)，1705(CO)；HNMR(CDCl3)：δ1.72(d，J＝11Hz)，3.78(dt)，1.06(3H，d)，4.57(dt)，2.76(dt)，2.07(3H，s)；¹³CNMR：δ220.58，170.32，138.33，134.31，71.71，70.47，65.30，58.70，57.21，50.11，48.61，47.15，40.89，37.10，36.86，34.70，34.35，33.92，31.10，30.83，29.78，29.33，27.99，25.91，24.92，24.05，23.38，21.45，与文献报道的数据进行比较，确证所得到的结晶确为23-乙酰泽泻醇B。