[发明专利]一种粪肠球菌ANSE228及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种粪肠球菌及其应用。 

背景技术

随着社会和科学的发展，食品安全性日益受到人们的关注，因为不安全食品不仅危害人体健康和生命，甚至还可能对子孙后代产生不利影响。社会呼吁绿色、安全的食品，而饲料的安全就是食品的安全。 

抗生素作为饲料添加剂，对于促进动物生长发育、提高疾病抵抗力等方面具有重要作用。但其长时间的大量使用导致了一些负面效应的产生，譬如破坏了动物自身的微生态平衡，增加了畜禽消化道疾病发生的几率，并能使病原菌突变为耐药菌株等。更为重要的是，抗生素在动物体内的残留，通过食物链传给人类，给人们健康带来隐患。鉴于此，很多国家都在饲料中禁用和限用抗生素作为饲料添加剂。因此，抗生素替代产品的开发也成了世界各国研究的重点。其中微生态制剂由于其独特的优势，如广谱的非特异性抑菌和杀菌作用、绿色环保、无残留等，在使用抗生素替代领域正得到越来越多的重视。 

本研究以粪肠球菌(Enterococcus faecium)作为研究对象，整合了现有的对益生粪肠球菌的理论和实践认识，筛选出具有抗菌活性、抗逆性以及安全性的益生粪肠球菌，优化该菌的发酵工艺并，研究其作为微生态制剂对动物生产性能的影响，为益生粪肠球菌的应用和实践奠定基础。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种粪肠球菌。 

本发明的另一目的在于提供上述粪肠球菌的应用。 

本发明的目的还在于提供一种微生态制剂。 

本发明的再一目的在于提供上述微生态制剂的应用。 

为了实现本发明的目的，本发明提供一种粪肠球菌(Enterococcusfaecium)ANSE228，其保藏编号为CGMCC No.4082，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2010年8月16日。所述粪肠球菌ANSE228是通过反复分离、纯化、复壮等工艺得到，具有生物活性强、益生性显著并且抗逆性能好等优点。 

本发明中所述粪肠球菌ANSE228的培养方法如下：取粪肠球菌ANSE228种子液1-5ml(种子液是挑取的单个菌落在种子液培养基中培养的，其活菌浓度以10⁹CFU/ml计；种子液的培养基和培养条件与发酵的培养基和培养条件相同)，接种到50-100ml培养基中进行摇瓶发酵培养。所述培养基由如下组分组成：玉米粉10-25g/L、豆粕10-30g/L、葡萄糖0-15g/L、磷酸氢二钾0.1-0.2g、磷酸二氢钾1.0-2.0g、一水硫酸锰0.5-2.0g、七水硫酸镁0.5-2.0g、蒸馏水800-1200mL，pH值为6.5-7.5。 

其中，优选为：玉米粉15g，豆粕20g，葡萄糖5g、磷酸氢二钾0.15g、磷酸二氢钾1.5g、一水硫酸锰1.0g、七水硫酸镁1.5g、蒸馏水1000mL，pH值为7.0。 

本发明中所述摇瓶发酵的条件为：发酵温度25-45℃，发酵时间18-36h，pH值6.5-7.5，静置培养；优选为：发酵温度37℃、发酵时间24h、pH值7.0。 

10L发酵罐中试培养基与摇瓶发酵培养基相同。10L发酵罐中试发酵条件为：装液量为4-7L培养基，接种量为30-100ml摇瓶种子液，发酵温度为25-45℃，发酵时间18-36h，pH值6.5-7.5，搅拌转速200-400r/min。其中，优选为：装液量为5L培养基，接种量为50ml摇瓶种子液发酵温度为37℃，发酵时间24h，pH值7.0，搅拌转速300r/min。 

本发明还提供粪肠球菌ANSE228在抑制鸡白痢沙门氏菌、大肠杆菌和/或金黄色葡萄球菌中的应用。所述菌株具有显著的益生性，可显著抑制鸡白痢沙门氏菌、大肠杆菌以及金黄色葡萄球菌等致病菌的生长繁殖。 

本发明还提供所述粪肠球菌ANSE228在模拟胃液和/或模拟胆盐和/或 75-90℃的高温环境中的应用。所述菌株具有较强的抗逆性，可以耐受模拟胃酸、模拟胆盐以及高温环境，并且能保持80％以上较高的活菌存活率。 

本发明粪肠球菌ANSE228的益生性的检验方法如下：