[发明专利]基于候选基因PRL多态性的分子育种方法

说明书

技术领域

本发明涉及鸡育种的技术领域，特别是使用PRL候选基因多态性进行分子育种的方法。

背景技术

中国地方鸡品种众多，肉质风味优良，为世界所公认。以我国地方鸡品种为主要育种素材或为直接种源的优质肉鸡生产已成为当前我国畜牧业新的经济增长点。我国优质肉鸡的饲养量每年以10%-20%的比例增长，然而我国地方鸡种所存在的产蛋量和合格种蛋率低等缺点，已成为制约优质肉鸡产业向高效化发展的瓶颈。中国很多地方优质鸡种年产蛋量在100个左右，最低仅为70个左右，产蛋最多的浙江仙居鸡和江西的白耳黄鸡也不过在180个左右，与进口蛋鸡年产280-320个相差35%-75%，中国地方优质鸡产蛋量表型变异很大，因此，通过育种手段提高我国地方鸡种的产蛋性能还有较大的空间。衡量种鸡生产效率的指标不仅在于种母鸡的产蛋率，还在于种蛋受精率及孵化率，但我国优质鸡精液品质、种蛋合格率、种蛋受精率、孵化率等繁殖力性状的选育程度普遍不高，因此，在选育提高种母鸡产蛋性能的同时，选择提高受精率、孵化率等繁殖性状指标在生产中已同样十分重要。由于鸡繁殖性状是低遗传力性状，通过常规选择手段进行选育所获得的遗传进展十分有限且周期较长，如何运用现代分子生物技术对鸡繁殖性状进行选择，是优质肉鸡育种领域需要创新和突破的关键技术之一。

发明内容

本发明目的是提供了一种利用候选基因PRL多态性进行分子育种的方法。

本发明根据GenBank上下丘脑-垂体-卵巢或睾丸这一繁殖轴上PRL基因对鸡繁殖性状及其翻译蛋白影响的差异，实施标记辅助育种。

建立了用于基因表达分析的RT-PCR方法。

运用测序分型方法检测地方鸡种中PRL基因的突变。

本发明围绕鸡性腺轴组织中的繁殖性状候选基因PRL对鸡繁殖性状，mRNA差异表达及其翻译蛋白的差异，探究影响鸡繁殖性状表达的因素，初步阐明鸡繁殖性状遗传的分子机理，从而客观了解PRL基因在生殖发育过程中的作用，同时有助于分析其对繁殖性能的影响，为标记辅助育种提供依据，从而加速繁殖性状的改良，发挥其潜在的经济效益。

本发明的实验方法是在GenBank上获得PRL基因mRNA序列。

本发明的实验设计是借助引物进行PRL基因的克隆。

本发明建立了用于基因表达分析的FQ-PCR、RT-PCR技术和Western Blot技术。

本发明运用LDR测序分型技术对矮小型黄鸡亲本品系中PRL基因的突变进行了检测，发现PRL基因在矮小型黄鸡上有3个突变位点，基因型分布在不同品系间存在显著差异，经检验2个突变位点对母鸡连产天数、300日龄产蛋数及公鸡射精量、精子密度产生较大的效应，对鸡的繁殖性能有显著影响。

本发明寻找差异表达基因，揭示基因组在时、空上的表达及调控模式，研究表明差异表达基因不仅表现为表达基因的种类改变，还表现为基因表达量的改变。动物生长、发育是基因在内外因素协同作用下，在时间和空间上顺序表达的过程，表达方式以合成某种蛋白质为主。

本发明用荧光实时定量PCR法对S、Y、F、D四个品系的矮小型鸡PRL基因不同发育阶段表达进行了定量分析，发现PRL基因mRNA随着生长发育其表达量也增加，但发育到一定阶段后其表达水平保持相对恒定。性成熟早的母系鸡PRL基因mRNA表达量也较早的达到一个较高的水平，功能突变位点个基因型间对繁殖性能正相关的AA、CC基因型个体PRL基因的mRNA表达量也高于其他基因型个体。

本发明围绕鸡性腺轴下丘脑-垂体-卵巢或睾丸组织中的PRL基因差异表达及其翻译蛋白的功能、mRNA差异显示和差异蛋白质开展系统研究。探明PRL基因对鸡繁殖性状的基因效应及其分子调控机理，研究该基因对鸡繁殖性能的调控。

本发明用荧光实时定量PCR法对矮小型黄鸡S、Y、F、D系鸡的PRL基因不同发育阶段的表达进行了定量分析，结果表明：PRL基因随着生长发育其表达量也增加，但发育到一定阶段后其表达水平保持相对恒定。母系鸡性成熟早PRL基因表达量也较早的达到一个较高的水平，PRL基因的不同基因型间对繁殖性能正相关的AA、CC基因型个体PRL基因的表达量也高于其他基因型个体。不同基因型PRL基因的mRNA在不同发育阶段表达丰度不同。繁殖性状的遗传是较复杂的遗传现象，只有研究不同的品种，了解与繁殖性状遗传在各品种中的一般性和特殊性，才能得出准确的判断。

具体实施方式