[发明专利]一种从杜仲叶中分离纯化绿原酸的方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及以植物为原料提取制备有效成分的方法，具体涉及从杜仲叶中分离纯化绿原酸的方法。

(二)背景技术

杜仲(Eucommia ulmoides Oliver)，古称“曼榆”，又名“木棉”，属杜仲科落叶乔木，为我国特有的经济树种，已有2000多年的栽培历史，产地分布全国，总量占世界90％以上。杜仲植物的干燥树皮具有补肝肾、强筋骨、降血压、抗肿瘤、抗菌等诸多功效，但杜仲皮一般需生长15～20年，周期长、资源相对紧缺且昂贵。杜仲叶的资源相对丰富、易得，全国约有杜仲林28万公顷，每年可产落叶达400万吨，而其利用率仅占可采集叶的10％～20％，这些丰富的杜仲叶资源一直被人们所忽视。近年来大量研究表明杜仲叶中绿原酸等黄酮类物质含量丰富，其主要化学成分与杜仲皮的化学成分基本一致，有一定的互补性，因此利用杜仲叶提取具有多种药理活性物质，充分利用我国的植物资源具有重要的经济意义和现实意义。

绿原酸为咖啡酸奎尼酸衍生物，具有利胆、抗菌、抗病毒、减压、增高白血球及调节中枢神经系统等多种药理作用，作为重要原料广泛用于保健品，药品、化妆品等工业。绿原酸多从植物中提取获得，目前国内外主要从生咖啡豆和金银花中提取绿原酸。杜仲叶中绿原酸含量为1％～5.5％，该含量在植物叶子中属于较高者，因此从杜仲叶中分离提取绿原酸具有广阔的开发前景。

微波是利用分子极化或离子导电效应而直接对物质进行加热的一种处理技术，因此微波辅助提取有效成分，能对不同组分进行选择性加热，使目标组分更容易从提取物中分离出来，且热效率高，能有效地提高提取效率。因此，微波辅助提取在原有单纯溶剂提取的基础上，可以有效地提高目标物的分离提取率，是物质分离提取中一种有效的辅助手段。

高速逆流色谱技术(High-Speed Counter-current Chroma-tography，HSCCC)是当前国际上较新型无固体载体的液-液分配技术。HSCCC依靠缠绕在自传轴上的聚四氟乙烯(PTFE)蛇形管在共转轴上进行特殊的同步行星式运动模式而产生的离心场作用，使互不相溶的两液体相的其中一相因离心力保留在柱中，另一相作为流动相，并使流动相单向、低速通过固定相，在短时间内实现样品在互不相溶的两相溶剂系统中高速分配，继而达到连续逆流萃取分离目的，被分离的各组分依据其在两相中分配系数的差异得到分离。HSCCC因其无固体支持物作固定相，所以避免了固体支持物或载体带来的样品吸附、变性、损失、污染、峰形拖尾等缺点，对颗粒或沉淀物质进行分离而不会造成色谱柱的堵塞；同时具有预处理简单，可直接进样粗制样品或合成混合物，且分离纯化制备可同步完成，洗脱组分可达到相当高的纯度，组分回收简单等优点。

目前，专利CN1400199A公开了一种从杜仲叶中连续提取活性物质的方法，该法以水、甲醇或乙醇为提取剂，通过大孔树脂分离、乙酸乙酯萃取和混合溶剂重结晶等工序提取绿原酸和杜仲总黄酮。该方法使用的是非极性树脂，对绿原酸的吸附率不高；采取的乙酸乙酯萃取、乙酸乙酯-氯仿重结晶，操作麻烦、溶剂复杂、母液回收设备要求高。专利CN1687435A公开了一种高纯度绿原酸工业化生产工艺，主要步骤为原料经石油醚预处理、生物复合酶提取、提取液调酸、乙酸乙酯萃取、碱中和萃取液后水相酸沉、沉淀重结晶。专利CN1273964A公开了一种杜仲叶制备绿原酸工艺，主要步骤如下：超声预处理、高温提取、超滤、乙酸乙酯萃取、D-140树脂分离等。目前已公开的相关杜仲叶中有效成分的分离制备专利，几乎都是涉及溶剂反复萃取、大孔树脂或硅胶柱分离、重溶与结晶等，存在操作复杂繁琐、周期长、所用溶剂复杂、组分的回收率不高等缺陷。

随着市场上对绿原酸的需求不断上涨，如何利用简便、快速的先进技术与设备从杜仲叶中得到质量稳定、纯度高、溶剂回收率较高的绿原酸将成为研究的热点，针对该类提取方法的研究十分必要。

(三)发明内容

本发明的目的是提供一种从杜仲叶中分离提取绿原酸的方法，该方法克服了溶剂提取杜仲叶中绿原酸的提取率低、分离纯化效果差、目标组分回收率低及纯度不高等缺陷。

本发明采用的技术方案如下：